微生物sop文件

微生物sop文件内容摘要：

杆菌 X X X X X 真菌 b X X 持续监测阳性，革兰染色阴性 c X X X a 所有培养至少孵育 48h； EMB：伊红美蓝琼脂； PEA：苯乙基醇琼脂；CAN：多粘菌素一萘啶酮酸琼脂。 b 增加真菌培养基 (如：沙保弱葡萄糖琼脂 )和 30℃孵育； c：接种硫羟乙酸盐肉汤中。 X：选择的培养基。 ☆有条件者选种。 革兰染色未找到细菌的血培养瓶，补充丫啶橙染色检查弯曲菌和布鲁菌，发现阳性者进行鉴定报告，未发现 阳性则应转种厌氧和需氧血平板，然后继续培养监测至终报告的时间，注意其他不常见细菌见附录。 革兰染色为形态均一的细菌，根据革兰染色结果选择抗菌药物进行直接抗菌药物敏感试验，同时转种培养，发现菌落，立即作细菌鉴定和标准抗菌药物敏感试验。 在使用双相培养基进行血培养时，如有菌落生长可直接进行组菌鉴定和标准抗菌药物敏感试验。 细菌鉴定见 M16，药敏试验见 M5。 六、结果报告 1．阳性结果报告 初级报告：阳性血培养结果非常重要，应该立即口头报告给医生，包括：革兰染色特性和形态，血培养阳性的瓶数和其它的鉴定信息 (如革兰阳性球菌疑实验室 主 题 文件编号 W001 广东省汕尾逸辉基金医院 检验科临床微生物室 血培养操作规范 第 11 页 共 137 页 第 1 版 第 0次修改 撰写日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 准 人 生效日期 似为葡萄球菌等 )。 报告之前，应该回顾一下患者近期标本微生物培养情况，这些结果有助于解释感染微生物的来源。 同时记录报告的日期，时间，内容以及接受报告人的姓名。 中级报告：报告直接抗菌药物敏感试验结果和细菌种属的初步鉴定结果 最终报告：报告细菌种属名和标准抗菌药物敏感试验结果 2．阴性报告：普通血培养 3 天无细菌生长可（电话）报告为：“ 72h 培养未见细菌生长”，但培养瓶要继续培养至 7/5 天，如果发现有菌生长，可发补充 /最终报告。 培养至所须时间仍为阴性，应转种巧克力平板 /血平板。 某些特殊致病 菌培养时间需延长，详见附录。 附 录 附一：血培养特殊致病菌的处理 1．分枝杆菌：从血液中分离培养分枝杆菌需特殊培养基，通常局限于免疫抑制和 AIDS 的患者。 大多数播散性分枝杆菌感染是由鸟分枝杆菌复合体引起，通常出现于 CD4 细胞 100／ mm3 的 AIDS 患者。 2．裂解一离心、 BACTEC 12B 或 13A， Bact／ Alert(r)MP 培养基均可用于分离培养分枝杆菌。 将裂解一离心管中的沉淀物接种至 7Hll培养基中，如果记录了采集的血标本量，裂解一离心法可进行菌落计数定量分析。 BACTEC 12B培养基会抑制某些鸟分枝杆菌复合体的生长， BACTEC 13A 培养基专门用于分离血液中的分枝杆菌，接种的血量为 5ml，它避免了处理裂解一离心血培养物时所遇到的潜在危险性。 2．细菌 L 型：血液中很少分离出细胞壁缺陷的细菌。 含 10％蔗糖或甘露醇渗透压恒定的培养基，适合培养细胞壁缺陷的细菌。 该培养基也适合某些细胞壁完整的细菌生长，因此在这类培养基中分离出某种细菌，并不意味着血液中一定有细菌 L 型。 3．布鲁菌属：通常将血液接种至含有双相培养基的卡斯塔涅达培养瓶(Castaneda bottles)中进行培养。 固相培养基采用琼脂补充到胰酶消化大豆琼脂，胰蛋白胨琼脂或布鲁菌琼脂，使琼脂的终浓度为 2． 5％。 液相培养基采用不含琼脂的相同培养基基础，当培养瓶内琼脂凝固后，再以无菌手续将液相培养基基础倾入瓶内即可。 卡斯塔涅达培养瓶内 CO2 浓度应为 5％～ 10％， 35～ 37℃孵育，每 48h 观察有无细菌生长。 无菌生长，将培养瓶倾斜，使肉汤流过琼脂表面。 阴性血培养瓶应延长培养至 30 天后扔弃。 4．营养变异链球菌：该种细菌的生长需要补充琉醇复合物和维生素 B6。 人血培养基中含有足够的营养成分使营养变异链球菌生长。 然而传代培养时，培养基中需要补充盐酸一磷酸吡哆醛 (％ )或 L 半胱氨酸 (％至 ％ )或二者皆有，否则营养变异链球菌不能生长。 也可将血培养物传种至血琼脂乎板上，然后交叉划线接种金黄色葡萄球菌，在金黄色葡萄球菌菌落周围有营养变异链球菌卫星样菌落。 5．真菌：多种方法可提高血液中真菌的检出率，包括使用需氧血培养瓶、双相培养基、裂解一离心技术和特殊营养的肉汤培养基 (如脑心浸液波肉汤等 )。 裂解一离心技术是一种分离真菌的有效方法，特别是对于营养要求苛刻的双相实验室 主 题 文件编号 W001 广东省汕尾逸辉基金医院 检验科临床微生物室 血培养操作规范 第 12 页 共 137 页 第 1 版 第 0次修改 撰写日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 准 人 生效日期 真菌。 实际上，大多数需氧血培养瓶，孵 育 5～ 7 天，可提供充足的营养使白念珠菌生长良好。 然而对于非白念珠菌、光滑球拟酵母菌、新型隐球菌、荚膜组织胞浆菌和其它双相真菌，使用裂解一离心技术可获得最高的检出率，通常采用霉菌抑制琼脂 (1nhibitorymoldagar)，脑心浸液琼脂和巧克力琼脂与 Isolator 管结合使用。 阴性的真菌血培养应于 22～ 30℃孵育 4 周后发终报告。 6．心内膜炎特殊致病菌：如果常规血培养 48h 阴性而临床症状仍提示感染性心内膜炎，临床医生和微生物学家应考虑使用特殊的培养技术。 对于分离一些生长缓慢，营养要求苛刻的革兰阴性 杆菌 (如嗜沫嗜血杆菌、人心杆菌、伴放线放线杆菌、啮蚀艾肯氏菌、金氏金氏菌、军团菌属、 Quintana 巴尔通体和布鲁菌属等 )，应延长培养 2— 4 周，然后传种特殊的培养基。 如果怀疑真菌性心内膜炎，应进行裂解一离心血培养。 伯氏柯克斯体或衣原体引起的心内膜炎通常进行血清学诊断。 附二：主要培养基制备 1．血琼脂培养基 (1000mi) 成份： 哥伦比亚琼脂基础 39g 蒸馏水 950ml 177。 无菌马血或羊血 50～ 60ml。 制备方法： 加热溶解 上述成份，高压 121℃， 15 分钟，水浴冷却至 50℃，无菌手续加入脱纤维马血或羊血 50～ 60ml。 注意：如果基础培养过热不能加入马血或羊血，马血或羊血使用前一定要作无菌试验，加血液量取决于红细胞与血浆比。 贮藏： 4℃， 30 天 质控： 肺炎链球菌 ATCC49619：生长， α－溶血 化脓链球菌 ATCCl9615：生长， β－溶血 金黄色葡萄球菌 ATCC25923：生长 大肠杆菌 ATCC25922：生长 2．厌氧血琼脂培养基 (1000ml) 成份： 哥伦比亚琼 脂基础 39g 蒸馏水 950ml 调 177。 无菌马血或羊血 50 一 60ml。 氯化血红素 5mg 维生素 K 0． 5mg 制备方法： 加热溶解上述成份，高压 121℃， 15 分钟，水浴冷却至 50C，无菌手续加实验室 主 题 文件编号 W001 广东省汕尾逸辉基金医院 检验科临床微生物室 血培养操作规范 第 13 页 共 137 页 第 1 版 第 0次修改 撰写日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 准 人 生效日期 入脱纤维马血 (或羊血 )，氯化血红素和维生素 K。 注意：如果基础培养过热不能加入马血或羊血，马血或羊血使用前一定要作无菌试验，加血液量取决于红细胞与血浆比。 贮藏： 4℃， 30 天 质控： 难辨羧菌 ATCCl3124：生长，双溶 血 脆弱拟杆菌 ATCC25285：生长 主要参考文献 1． Dunne JR， Frederick S Nolte， Michael L Wilson。 Blood Cultures III， CumlteehlB， Amerman Soclety fOr Mlcrobi010gy， 1997；1－ 21。 2． Vandepltte J， Engbaek K， Pio tP， Heuck CC 著，王登先，白念峰，史旭波等译。 血液，临床细菌学基础实验室程序，人民卫 生出版社， 1997； 19—22。 3． Barbara SR， Gall LW， Richard BThorftsoD JR， Divise HL， et al． SPecimen processing， Manual Of Clinical Microbiology(7„ Editon)， ASM， Washlngton，DC， 1999， 64— 104． 4．主编：徐英春，倪语星，王金良，作者：赵锐，张小江，王辉，谢秀丽。 血培养操作规范，上海科学技术出版社， 2020， 1— 3l 实验室 主 题 文件编号 W002 广东省汕尾逸辉基金医院 检验科临床微生物室 尿路感染细菌学 检查规范 第 14 页 共 137 页 第 1 版 第 0次修改 撰写日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 准 人 生效日期 尿路感 染细菌学检查规范 一、相关临床知识 (一 )概述 尿道感染是指尿道内有大量微生物繁殖而引起的尿路炎症。 从肾脏排泌出来的尿液正常情况下是无菌的。 如果在尿液中分离出细菌 (排除污染因素 )即称为菌尿，同时伴有感染症状者称为尿路感染。 尿路感染并非是一种单一的疾病，而是一种临床综合症。 根据感染部位可分为上尿路感染 (肾盂肾炎 )及下尿路感染 (膀胱炎 )，男性还可出现前列腺炎。 不同部位同时感染也很常见。 (二 )易感人群 尿路感染是人类最常见的感染之一，可发生于各个年龄段的人群，好发于女性，男：女之 比为 1： 10。 (三 )发病机理及常见致病菌 上行感染：肠道菌群逆行感染是泌尿系感染最常见的方式。 女性尿道宽而短，且尿道口距肛门较近而常被粪便细菌污染，故更易感染；此外，女性阴道菌群也是尿路感染病原菌的又一个主要来源。 这种方式引起的感染多为单一细菌感染，大肠埃希菌是主要致病菌，其次是克雷伯菌属和变形杆菌属 (后两者远远少于前者 )，有时也会发生混合感染。 泌尿系统解剖结构和生理功能改变引起的感染：如留置导尿管，肾盂造瘘术，尿路结石，尿路重建、前列腺肥大，膀胱排空能力受损等，不仅有利 于微生物的粘附和侵入，使感染易发，而且改变了尿路感染的致病菌范围，其感染菌除上述的大肠埃希菌、克雷伯菌属和变形杆菌属以外，其他革兰阴性杆菌如肠杆菌属，普罗威登菌属、沙雷菌属、不动杆菌属、假单胞菌属也是常见的致病菌；此外，由血浆凝固酶阴性葡萄球菌、肠球菌和酵母菌等引起的感染也很常见；并且容易发生多种微生物的混合感染，易被误认为标本污染。 血行感染：是一种比较少见的感染方式。 菌血症病人，血液中的细菌可通过血流进入肾脏，引起感染。 常见的病原菌有葡萄球菌、伤寒沙门菌、念珠菌和结核分枝杆菌等。 直接感染：外伤或肾周围器官发生感染时，细菌可直接侵入肾脏引起感染。 淋巴管感染：更为少见，当盆腔器官炎症、阑尾炎和结肠炎时，细菌可经淋巴管引起肾盂肾炎。 (四 )临床表现 尿路感染典型的临床表现是发热、尿频、尿急、尿痛、排尿困难和耻骨上压痛。 可因患者的年龄和健康情况而不同，新生儿尿路感染的症状往往是非特异性的、模糊的，可表现有厌食，呕吐，倦怠，无发热的菌血症等；婴儿期直到 2 岁，常有高热； 2 岁以后的尿路感染才会有典型的临床表现；老年患者的尿路感 染常缺乏明显的症状，更易造成菌血症和 急性肾功能衰竭。 (五 )尿培养检查的临床指征 (有下列情况之一者，应进行尿培养 ) (1)有典型的尿路感染症状； 实验室 主 题 文件编号 W002 广东省汕尾逸辉基金医院 检验科临床微生物室 尿路感染细菌学 检查规范 第 15 页 共 137 页 第 1 版 第 0次修改 撰写日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 准 人 生效日期 (2)肉眼脓尿或血尿； (3)尿常规：白细胞和／或亚硝酸盐阳性； (4)不明原因的发热，无其他局部症状； (5)留置导尿管的病人出现。