bd流式细胞仪培训手册

bd流式细胞仪培训手册内容摘要：

，必要时需调节 FL2%FL1， FL1%FL2（若 3色样本，必要时需调节 FL2%FL FL1%FL FL3%FL FL2%FL3的 补偿）。 21. High RUN，换上单染 CD3FITC管。 点击 Acquisition Control窗口中的 Acquire。 调节 FL2%FL1使 FITC阳性细胞在 FL1/FL2散点图的右下象限。 补偿调节可通过点击 来选择或直接拖动滑标上下移动。 调节完毕，点击 Acquisition Control窗口中的 Pause。 22. 移去单染 CD3，换上单染 CD19PE管。 点击Acquisition Control窗口中的 Restart。 调节 FL1%FL2使 PE+细胞在 FL1/FL2散点图的左上象限。 调节完毕，点击 Acquisition Control窗口中的 Pause。 FACS101 Handbook 12 – 23. 最后以 CD3FITC/CD19PE双染样本上机，点击 Acquisition Control窗口中的 Restart，确定三群细胞工整垂直。 当您已完成 2色荧光之光谱重迭时，点击 Acquisition Control窗口中的 Pause、 Abort。 24. 移去样本管，换上 dH2O管，让仪器暂且处于 Standby状态。 关闭Compensation窗口。 您已完成 2色荧光之最适 化。 决定储存细胞总数 25. 预设之「 储存细胞总数 」为 10000。 如需修改，从Acquire菜单中选择 Acquisition amp。 Storage，并在出现的窗口功，确认 「 Collection Criteria」从 10000 of All，再点击 OK。 FACS101 Handbook 13 – 26. 找个档案匣准备储存数据。 从 Acquire 菜单中选择 Parameter Description，出现 Parameter Description对话方框。 点击 Folder，并在随后出现之对话方 框，选择「 Your Folder」或新建活页夹，点击此对话方框的 Select ‘Your Folder‘。 27. 命名即将储存之文件名：点击 Parameter Description对话方框的 File，出现文件名编辑窗口。 在 Custom Prefix中：输入文件名 20202031，点击此对话方框的 OK。 日期为最常用之文件名系统。 28. Optional：如有需要，可选择或在 P1P5后的空格中输入相关参数名。 如P1： Size, P2： Granularity, P3：CD3 FITC。 输入参数名会存入实验档案中，显示在图谱上。 计数器 Counters 29. 从 Acquire 菜单中选择 Counters. 窗口会显示样品分析速率、与总数进度。 收集实验数据 30. 你可以开始 收集实验数据了。 HIGH RUN，将第一管样品放到检测区，在Acquisition Control窗口中，将  Setup 改成  Setup，此时 CellQuest会自动显示 Your Folder：。 点击“ Acquire‖ 便可启动样品之分析测定与数据 储存。 当计算机成功地收取足够数据，会自动储存数据文件 ，并会以“嘟”声告知， CellQuest会自动升幂附加档名成。 等待下一指示。 31. 你可以 换上下一管样品，点击“ Acquire‖ 启动样品之分析测定与数据储存。 可继续分析直到所有检品都分析完毕。 FACS101 Handbook 14 – ： 32. 不建议长期使用硬盘储存数据 数据，可考虑以烧光盘 （如配有 CDRW）、口袋硬盘（ Flash Drive）来备份大量实验数据，以免占用原有硬盘的内存， 影响数据处理速度。 可将备份后之数据，拿到另一苹果计算机或个人 PC进行离机分析。 33. 确认所有档案皆己备份后，以鼠标圈选欲删除 数据 ，将其拖拉至 Trash筒。 退出软件 34. 检品分析完毕后，记得从屏幕上方 File 指令栏选择 Save As，储存实验文件，以备日后使用，不需每次重新编辑。 35. 从屏幕上方 Cytometer 指令栏，选择 Instrument Setting，出现 Instrument Setting窗口。 点系 print打印此次实验条件，可贴入实验笔记留底，再点击 Save以储存此一实验的仪器条件，供日后再使用。 点系 SAVE后会出现文件保存对话方框，选择文件目录及文件名（例： Your Folder： /Your Setting1），点击Save。 点击 Done。 36. 检品分析完毕后，用鼠标从屏幕上方 Acquire 指令栏中，选取 Disconnect to Cytometer 以断绝计算机与仪器间之联机。 之后如不分析数据，您可退出软件“ File” “ Quit” (遇有选项永远选择“ Don‗t save” )，进行关机程序。 管路清洗 37. 以 2 ml 10％ 漂白水取代样品，将样品架置于左位以外管吸除约 1 ml，再将样品架置于中位 HI RUN 十分钟。 改用 2 ml DI water。 重复上述程序，样品架上留约 1 ml DI water。 按 STANDBY五分钟。 关主机、关计算机 FACS101 Handbook 15 – 四、数据分析 FCS list mode 数据文件： 说明： FCS list mode 数据文件 是流式细胞仪的标准格式档案（ ）。 该文件含有从流式细胞仪收取的平均 10,000个细胞数的资料，含有 4~6个参数。 一般软件无法打开 list mode数据文件，需藉助如 CellQuest, WinList, WinMDI, 等 Flow 分析软件 ，才可开启、绘图、并进行分析统计。 开启一 CellQuest实验文件 1. 从屏幕上方 File 菜单中选择 New。 桌面会出现一 ‘Untitled‘ 实验文件，可点击实验文件的右上角的放大钮，将实验文件窗口放大。 （双色） 2. 从工具板中点击散点图图示。 在实验文件的空白区点击，然后拖动对角线至适当大小。 Plot 拖曳完成后可以在右方看到 Dot Plot对话框。 FACS101 Handbook 16 – 3. 在 Dot Plot方框中， Plot Source应预设为 Analysis，可 点击 Select File 钮，并用随后之方框来开启 预 存之 Sample Files，它们的路径位于 Mac HD： BD Applications： CellQuest Folder： Sample Files。 连续双击鼠标来打开次目录，找到档案后，点击 Open来开启 NORM001 档案。 X 与 Y 参数项会出现默认值 —FSCH 256 与 SSCH 256， 在 Color方框 中点击 Multicolor Gating，确认无误之后，点击 OK 便完成了一个 NORM001 的 FSC /SSC散点图。 4. 工具板中选择多角形区隔工具，将 Cursor 移至 FSC/SSC散点图上，并沿着淋巴球聚落周边画出范围，连点击两次可关闭该区域。 你已完成 R1区域的界定，我们将以此区域来圈选淋巴细胞。 (如果要删除 R1区域，您可以在工具栏中点选 Gates → Region list，以鼠标点选 R1，再按 Delete 键删除 R1 区域。 删除 R1区域后，可用绘图工具板，重画 R1。 ) 5. 从 Plots菜单中选择 Dot Plot可复制一个同样大小的散点图，屏幕上会出现一 Dot Plot。