hiv初筛实验室sop文件

hiv初筛实验室sop文件内容摘要：

加样后，阳性标本可在 1~30 分钟内检出。 30 分钟后观察结果将造成影响。 （三） 试验结果 阳性：测试卡在检测区和对照区位置出现两条紫红色条带。 如果检测的紫红色条 17 带隐约可见，应用酶免试剂重复检测。 阴性：测试卡只在对照区位置出现一条紫红色条带。 失效：对照区未出现紫红色条带。 【方法】双抗原夹心酶联免疫法 【原理】采用双抗原夹心两步法检测人血清或血浆样本中的 HIV 抗体。 当待检样本中存在 HIV 抗体时，在反应过程中形成“固相 HIV 抗原－ HIV 抗体－酶标记 HIV 抗原”的免疫复合物，加入底物后形成显色反应。 【 HIV 筛查试验操作程序】 （一） 试验前准备： 1. 试验开始前将试剂和样品放置于室温（ 18~25℃ ）半小时 ，编号。 2. 换隔离衣，戴好帽子、口罩、双层手套。 3. 缓冲液配制：用蒸馏水 1： 19 倍稀释，现用现配。 或液体内有结晶，应放置在 37℃ 直至溶解。 （二）试验操作 50ul待测样品及阴、阳性对照血清。 ，置 37℃ 温育 30min. 5 次（每次应保持 30~60 秒浸泡时间），扣干。 100ul。 ，置 37℃ 温育 30min。 5 次（每次应保持 30~60 秒浸泡时间），扣干。 A、 B 各 50ul，轻拍混匀，覆上封板膜，置 37℃ 暗置 20min。 50ul。 （三）试验结果 以上且阴性对照值小于 方可认为本实验有效。 value=+阴性对照均值（若阴性对照小于 以 计） OD值大于或等于临界值为初筛阳性，小于临界值为阴性。 18 第三章 结果报 告与注意事项 【复检试验】 对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。 如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告 HIV 抗体阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认。 （具体详见流程图） 【筛试验结果的报告】 对 HIV 抗体筛查试验，呈阴性反应者可出具 “HIV抗体阴性 ”报告。 对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性报告，可出具 “HIV抗体待复查 ”报告。 【初筛试验呈阳性反应样品的转送】 如需送上级实验室进行复测或确认，需要填写 “HIV 抗体复测送检单 ”，经 1名检验人员和 1 名具有中级以上技术职称的人员审核签字，与血样品一同送天山区疾控中心实验室，再转送市疾控中心艾滋病确认实验室，或在本实验室复检后直接送确认实验室。 【操作台消毒处理】 用 3~5%84 消毒液擦拭台面，如工作台被溢出物污染，则用消毒液浸泡 30分钟后，再行擦拭。 【房间消毒】 每日用紫外线照射 30~60min 【方法学特性及注意事项】 a) 试剂盒 4~30℃ 干燥保存。 有效期 16 个月。 b) 抗凝全血应采用 EDTA，样品应避免溶血。 c) 样品应在收集后 7 天内检测， 2~8℃ 保存，如果大于 7 天，应冷冻保存。 d) 测试 卡仅用于 HIV 抗体的现场初筛，检测阳性必须用 ELISA 方法进 19 一步确认。 e) 样本的加样应使用微量加样器准确加入。 f) 实验环境应保持一定湿度、避风， 18~25℃ 进行。 g) 本试剂盒应视为有感染源的物品，应按生物危险样品处理。 【血清加样表】见附件。 每次检测完毕需填写血清加样表，由审核者签字复核，存档，以备查。 20 第三部分 设备 SOP 文件 一、 北京普朗 自动酶标仪 DNM9602 1． 仪器简介 RT2100C 是一台网络化的酶标免疫测试分析仪器，可广泛用于传染病、肿瘤标志物、血液病、艾滋病 、内分泌障碍测定等诊断领域。 2． 仪器原理 3． 环境要求： 1) 避免阳光直晒 2) 温度： 10℃ ~40℃，湿度 20%~85% 3) 电源必须接地良好 4) 电源稳定，禁止与大功率用电器共用电源 4． 操作步骤 4． 1 开机 打开仪器背面的电源开关，等待约 10 秒钟，开机初始化流程要完成以下工作： 1) 系统程序加载 2) 系统自检 3) 读取用户数据 4) 前端初始化 5) 等待光源稳定：仪器需要等待光源稳定约 1 分钟左右。 6) 光路自检：期间滤光片轮会转动，酶标板将往返走板一次。 开机结束后，进行主菜单窗口。 光学及比色系统 信号放大 A/D转换 计算机 LCD 显示屏 触摸屏 打印机 21 4． 2 项目设 置 在主菜单中按 [项目设置 ]键，进入项目列表窗口。 4． 2． 1 新建与更改项目 按 [新建 ]或 [更改 ]键，添加或更改项目，如果项目数已经超过 100，将无法创建新项目。 按图所示设置参数设置。 1) 项目名称：该项必须输入，注意不要与已经存在的项目名重复。 2) 试剂名称：根据所用试输入，也可以不输入。 3) 波长：从列表中选取，注意主波长和次波长不能重复。 4) 计算方法：从列表中选取 5) 双样本：若选择双样本，则布板时每个样本孔的相邻孔自动设置为重复孔，计算时取两者吸光度的平均值。 6) 空白上限：职由试剂要求空白必须不超过 ,则空白应设 为 ，测试时如果空白孔吸光度值超过设定的上限，系统会提示用户“空白也吸光度值过高”。 7) 定量计算，根据试剂说明输入： a) 标准品数量：选择 2~8 个标准品。 b) 浓度单位：从列表中选择。 c) 双标准：若选择双标准：则布板时每个标准孔的相邻孔被自动设置为重复孔，计算时取两者吸光度的平均值。 d) 标准品吸光度：双击标准品浓度列表项，可以在弹出窗口中输入浓度值，注意标准品浓度顺序必须为由小到大。 8）计算，按试剂说明在窗口中输入： a) Cutoff 公式系数：各钟试剂的定性公式如有不同形式如 S/N，（ NS） /N 等均可转换为 S/（ X*N+Y*P+Fac）的形式。 b) 阴性对照和阳性对照的吸光度范围：对照的吸光度超出上限和下限进分别按上限和下限计算。 例如有试剂要求阴性对照小于 0。 05 按 0。 05 计，则阴性对照下限应设为 0。 05。 c) 对照：可以任意设置对照，但对照的数量不超过 5 个，计算时取所有对照吸光度的平均值。 9）阴阳性判定设置窗口 在此窗口中输入判定阴性和阳性的临界值，吸光度模式下，临界值为吸光度值：Cutoff 方式 下，临界值为样本与 Cutoff 值的比值，定量计算方式下，临界值为浓度值。 定性方式分为 3 类： a) 正向阈值模 式：阴性＜阴性临界值，阳性≥阳性临界值，两者之间为灰区，在此区间内的样本判定为可疑。 b) 反向阈值模式：阴性＞阴性临界值，阳性≤阳性临界值。 c) 不需要判定阴阳性：在定性方式 中选择“无。 所有参数设置完毕，按 [完成 ]键。 4． 3 样品测试 在主菜单中按 [样品测试 ]键，进入如下窗口： a) 布板方向：横向或纵向 b) 进板方式：选择连续方式（＜ 5 秒）提高测量速度，选择步进方式（＜ 15 秒）获得更高的测量精度。 c) 振板参数：振板速度分快速，中速和慢速 3 档，振板时间 1~60 秒，也可以选择不振板。 22 设定完以上参数后，按 [确定 ]键，进入布 板窗口。 4． 4 布板 4． 4． 1 样本 任意点击欲设置为样本的孔位，样本号从 1 起自动递增并显示在该孔位上。 如果要修改样本号，可再次点击该孔位。 4． 4． 2 空白 空白孔在项目测试中用以吸光度调零，即其它孔位的吸光度均要减去空白孔吸光度值。 根据不同项目测试的要求，可以选择是否设定空白。 旧空白的保存和使用：空白孔的测试结果将自动保存，如果在同一项目的后续测试中不重新设定空白，则系统自动用旧空白进行计算。 第个项目只允许设置一个空白孔，如果在设置空白孔时多次点击不同的孔位，那么只有最后一次点击的孔位被设定为空白孔 ，前面设置的空白孔被自动清除。 4． 4． 3 依次设置阴性对照和阳性对照。 按 [开始 ]键，系统确认布板无误后，开始走板测试。 走板结束，系统自动进入吸光度显示。 4． 5 关机 在主菜单中按 [关机 ]，系统显示关机确认窗口，按 [YES]执行关机程序，按 [NO]返回主菜单。 5． 仪器维护 1) 保持仪器工作环境的清洁。 2) 仪器表面的清洁，可以用中性清洁剂和湿布擦拭。 3) 液晶显示器请用柔软的布清洁 4) 勿让任何溶剂，油脂类，腐蚀性物质接触仪器。 二、 DG3080 自动 洗板机 1 目的 规范洗板机的操作程序，保证洗板机的正常状态。 2 适用范围 本实验室 DNM9602 洗板机的操作。 3 操作人员 本实验室实验人员。 4 操作步骤 拔掉废液瓶口的塞子（接有与洗板机相连的废液管），倒掉废液瓶的废液，再把塞子安紧在废液瓶口上。 注意不要让废液管拧紧，以保证废液管的通畅。 拧开洗液瓶的盖子（接有与洗板机相连的洗液管），倒掉前一天洗液瓶里剩的洗液，倒进新配的洗液。 拧紧盖子，注意不要让洗液管拧紧，以保证洗液管 的通畅。 保证待洗反应板所有的孔处于同一水平位置，以免孔边缘过高碰到洗板机的吸液针。 开机 插上电源，打开电源开关（按后面板【 POWER】键），仪器显示 “仪器复位中，请稍候 ”仪器 23 初始化结束后。 仪器显示： “就绪，当前程序 X 请选择功能键 ”X 处显示的数字（范围 0~15之间）表示当前准备就绪的是第几号程序。 此时仪器正处于待机状态，用户可进行下一步操作。 预洗 在待机状态下，使预洗槽处于清洗头下方，按下【预洗 /返回】键，清洗头抬起，电磁阀打开，洗液进入预洗槽。 清洗头将对预洗槽洗涤 3 次，清洗容量为 400UL，但清洗时没有暂停和浸泡步骤。 编程 按下【编程】键。 进入编程菜 单界面。 画面最左边有闪动的指示光标 “→”，按下【 ↑】键或【 ↓】键移动所需要设定的参数前，按下【确定】键，即选中了该参数项，再按下【 ↑】或【 ↓】键设定该参数的参数值。 运行 按下【运行】键，系统将立即按照用户设定的程序执行。 关机 日常关机 最后一次洗板结束后，将电源开关置于【 OFF】位；并将酶标板托盘上的预洗槽用蒸馏水装满，使清洗头浸入预洗槽。 长期关机 将长时间不使用洗板机时，先用蒸馏水冲洗一遍整个系统，再进行日常关机；并且倾倒、清洗废液瓶，保持液体 干燥，以免清洗液中的缓冲盐类结晶而堵塞清洗头。 5 键盘功能 【编程】：进入编程菜单。 用来设定仪器的运行方式及各项参数。 【运行】：执行先定的程序。 【 ↑】：处于待机状态时，此键用来顺次递增程序号；处于编程状态时，用来使光标 “→”上移。 【 ↓】：处于待机状态时，此键用来顺次递减程序号；处于编程状态时，用来使光标 “→”下移。 【复位】：终止当前操作，使仪器恢复到开机状态。 【预洗 /返回】：处于待机状态时，此键用来使仪器执行预洗程序；处于编程状态时，此键可使显示面板界面 回到待机状态 【确定】：确认光标所指示的参数项。 6 编制洗涤程序 编程菜单中包括清洗方式、清洗头数、清洗条数、清洗容量、加洗次数、清洗次数、暂停时间、浸泡时间 8 种参数项目。 清洗方式，条洗和板洗。 清洗头数，可设定为 12 头或 8 头。 清洗条数，或设定在 1~12 范围内，该参数设置与清洗头数有关，当头数为 12 时条数最大值为 8。 反之当头数为 8 时，条数最大值为 12。 清洗容量，可在 50UL、 100UL、 150UL、 200UL、 250UL、 300UL、 350UL、 400UL、450UL 中选择设定。 加洗次数，加洗次数可在 1~3 范围内设定。 清洗次数，清洗次数可在 1~10 范围内设定。 暂停时间，当清洗方式为知洗时，清洗头在注满酶标板每行后启动暂停，时间可在 0~10秒内任意设定，增量为 1 秒；当清洗方式为板洗时，清洗头在每次过板注满水后启动暂停，时间可在 0~60 秒任意设定，增量为 5 秒。 浸泡时间，一般清洗过程中，清洗头在酶标板最后一行中注满水后，即启动浸泡功能。 浸泡时间可在 0~300 秒内任意设定，增量为 30 秒，但在加洗程序中不能启动浸 泡功能。 7 维护保养程序 24 平常不用时，拔掉电源插头。 每天洗板机工作结束时，要对内外其进行清洁，用湿抹布擦洗洗板机的外壁及载物台，以保证其洁净。 用蒸馏水将所有的管道清洗一遍，防止洗液的结晶堵塞管道。 及时倒弃废液，以免废液瓶过满致使废液回流而造成洗板机的故障。 保证待洗的反应板的孔边缘不要过高且水平，以免造。