贵州大学基因工程复习题库

贵州大学基因工程复习题库内容摘要：

（重组质粒或重组噬菌体 DNA），根据已知重组时外源基因两端的酶切位点，分别用相应的两种内切酶进行酶解，经琼脂糖电泳后，原 载体因无外源性目的基因，切开后变成线性，电泳呈一条带，若载体上有外源性目的基因插入，切开后电泳出现两条带：一条为载体质粒线性条带，一条为释放出的插入基因片断的小分子条带，这样就可以看出载体中是否有插入的目的基因片断，以及由 DNA marker 条带对比分析可得知插入基因片段的大小 (3). 目的基因序列测定 19。 是现代分子生物学领域理论上的三大发现和技术上的三大发明。 理论上的三大发现： ①证实了 DNA是遗传物质 ②揭示了 DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理 ③遗传密码 的破译和遗传信息传递方式的确定 技术上的三大发明： ①限制核酸内切酶的发现与 DNA 切割 ② DNA 连接酶的发现与 DNA 片段的连接 ③基因工程载体的研究与应用。 ⑴提高启动子强度 ⑵缩短启动子同克隆基因间距离 ⑶高效的翻译起始序列 ⑷高效的转录终止区 ⑸提高质粒拷贝数及稳定性 ⑹用以下方法提高翻译水平：①调整 SD 序列与 AUG 间的距离②用点突变的方法改变某些碱基③增加 mRNA 的稳定性的 ⑺减轻细胞的代谢负荷：①诱导表达②表达载体的诱导复制 ⑻提高表达蛋白的稳定 性，防止其降解：①克隆一段原核序列，表达融合蛋白②采用某种突变菌株③表达分泌蛋白质。 20 优点：大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，基础生物学、分子遗传学等方面的背景知识清楚，对其基因表达调控的分子机理也比较了解，而且历经二十年的基因工程实践，大肠杆菌已发展成为一种安全的基因工程实验体系，有多种适用的寄主菌株和载体系列，大肠杆菌易于进行工业化批量生产。 缺点：在通常情况下，细菌的 RNA 聚合酶不能识别真核的启动子；许多真核基因的蛋白质产物需要经过翻译后的加工修饰， 如正确的折叠和组装，而细菌中通常并没有这样的修饰机制，从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的翻译产物无法产生有活性的蛋白；外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别，并被当做“异已分子”降解掉。 互补筛选。 质粒载体具有β 半乳糖苷酶基因（ lacZ），当外源 DNA 插入到它的 lacZ，可造成表达后的β 半乳糖苷酶失活，利用这一点就可以通过大肠杆菌转化子菌落在添加有 XgalIPTG 培养基中的颜色变化鉴别出重组子和非重组子。 有些大肠杆菌上带有 lacZ 基因的部分编码序列，质粒载体中含有 别一部分编码序列，当质粒转入载体后，可形成具有酶活性的蛋白质。 这种 lacZ 基因上缺失了一部分编码序列的突变体与带有这一部分编码序列的突变体之间实现互补的现象叫α互补。 21。 1）相同点： 都是由能够编码蛋白质的编码区和具有调控作用的非编码区组成。 2）不同点： 原核细胞基因的编码区是连续的，真核细胞基因的编码区是间隔的，不连续的。 ⒈ 具有独立复制能力 ⒉ 具备多个限制酶的 识别位点 (多克隆位点 ) ⒊ 具有遗传表型或筛选标记 ⒋ 有足够的容量以容纳外源 DNA 片段 ⒌ 可导入受体细胞。 22 复习题 2 基因重组与基因工程 一、 A 型题 DNA 和载体 DNA 的酶是： （ A ） A． DNA 连接酶 B． DNA 聚合酶 Ⅰ C． DNA 聚合酶 Ⅱ D． DNA 聚合酶 Ⅲ E．反转录酶 DNA 的技术是： （ B ） A． Northern 印迹 B． Southern 印迹 C． Western 印迹 D．亲和层析 E．离子交换层析 DNA 技术中常用的工具酶： （ D ） A．限制性核酸内切酶 B． DNA 连接酶 C． DNA 聚合酶 Ⅰ D． RNA 聚合酶 E．反转录酶 ，下列哪项是错误的。 （ E ） A．限制性核酸内切酶分为三类，用于基因工程的为 Ⅱ 酶 B．限制性核酸内切酶切割后可产生粘性末端或平端 C．识别的核苷酸序列个数可以是 6 个或 8 个 D. 识别的序列一般具有回文结构 E．识别的 DN A 为单链 ，下列哪项是错误的。 （ B ） 23 A．基因工程也称基因克隆 B．只有质粒 DNA 可作为载体 C．重组体 DNA 转化或转染宿主细胞 D．需获得目的基因 E．需对重组 DN A 进行纯化、筛选 的叙述，下列哪项是错误的。 （ E ） A．小型环状双链 DNA 分子 B．可小到 2～ 3Kb 大到数百个 Kb C．能在宿主细胞中独立自主地进行复制 D．常含有耐药基因 E．只有一种限制性核酸内切酶切口 7．下列哪项不是重组 DN A 的连接方式。 （ C ） A．粘性末端与粘性末端的连接 B．平端与平端的连接 C. 粘性末端与平端的连接 D．人工接头连接 E．同聚物加尾连接 8． DNA 克隆不包括下列哪项步骤。 （ E ） A．选择一个适合的载体 B．限制性核酸内切酶在特异位点裂解质粒和目的基因 C．用连接酶连接载体 DNA 和目的 DNA，形成重组体 24 D．用载体的相应抗生素抗性筛选含重组 体的细菌 E．重组体用融合法导入细胞 9．基因重组是指 DNA 分子的： （ A ） A．共价连接 B．氢键连接 C．离子键连接 D．交换 E．退火 10．在分子生物学中，重组 DNA 又称为： （ D ） 工程 11．基因工程中，不常用到的酶是 （ E ） A．限制性核酸内切酶 B． DNA 聚合酶 C． DNA 连接酶 D．逆转录酶 E． DNA 解酶 12．能识别 DNA 的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链 DNA 的一类酶称为： （ B ） A. DNA 内切酶 B．限制性内切核酸酶 C．非限制性内切核酸酶 D．限制性外切核酸酶 E．非限制性外切核酸酶 13． cDNA 是指： （ A ） A．在体外经反转录合成的与 RNA 互补的 DNA B．在体外经反转录合成的与 DNA 互补的 DNA C．在体外经反转录合成的与 RNA 互补的 RNA D．在体内经反转录合成的与 RNA 互补的 RNA 25 E．在体内经反转录合成的与 RNA 互补的 DNA 14．质粒的分子结构是： （ A ） A．环状双链 DNA B．环状单链 DNA C．环状单链 RNA D．线状双链 DNA E．线状单链 DNA 15．聚合酶链式反应常常缩写为： （ E ） A． PRC B． PER C． PDR D． BCR E． PCR 16．用于 PCR 反应的酶是： （ E ） A． DNA 连接酶 B．碱性磷酸酶 C．逆转录酶 D．限制性内切核酸 E． Taq DNA 聚合酶 17．基因工程中使目的基因与载体拼接的酶是： （ C ） A． DNA 聚合酶 B． RNA 聚合酶 C． DNA 连接酶 D． RNA 连接酶 E．限制性核酸内切酶 18． α 互补筛选属于： （ C ） A．抗药性标志筛选 B．酶联免疫筛选 C．标志补救筛选 D．原位杂交筛选 E．免疫化学筛选 19．确切地讲， cDNA 文库包含： （ E ） A．一个物种的全部基因信息 B．一个物种的全部 R。