细胞生物学实验管理程序文件

细胞生物学实验管理程序文件内容摘要：

，单位为转 /分（ r/min）。 R 表示离心半经，即离心管底端至轴心的距离，单位为厘米（ cm）。 RCF 表示相对离心力，单位用重力加速度 g(g =)。 22 十一、恒温水浴箱操作使用程序 1. 目的： 保证水浴箱工作温度恒定。 2. 适用范围： DK— 型电热恒温水浴箱 3. 标准操作： 水浴箱应置于坚固的水平台上，电源电压须匹配。 在水浴箱内注入清洁温水至总高度 1/2～ 1/3 处。 把电源开关拨至“开”处，控温仪面板即有数字显示表示电源接通，同时将水泵开关拨至“开”处。 把温度控制器的温度调节旋钮按下，此时数字显示的温度为设定温度，同时旋转此按钮，观察显示数值、选择所需工作温 度。 松开温度调节旋钮此时数字显示的温度为水槽内测定温度，加热指示灯亮，仪器已进入自动恒温控制状态。 当水槽内测定温度达到设定温度时，加热中断、指示灯熄灭，再通电 90 分钟后，温度可保持稳定。 在每次水浴箱使用前，放入标准温度计同时监测实际水温，以校正温度。 水浴箱工作温度波动范围应控制在：设定温度 +/– 1℃以内。 水浴箱正面外下壁贴有温度质量控制表，记录每天温度；如温度超出正常范围，该温度应划上红圈，并把修正操作记录 23 下来。 水浴箱内外应保持清洁，外 壳忌用腐蚀性溶液擦拭。 仪器不用时，需套好塑料薄膜防尘罩，以免温度控制器受潮影响使用。 4． 每半年矫正一次。 24 十二、加样器操作使用及校准程序 1. 目的： 保证加样器加样的准确性。 2. 适用范围： 各种品牌、型号的固定、可调式多通道加样器。 3. 操作步骤： 设定容量值 根据所需取液量选择相应的加样器。 可调式加样器应在允许容量范围内调节。 连续可调式加样器容量计读数由三位拨号数字组成（显示所转移液体容量），从上（最大有 效数字）至下（最小有效数字）读取；利用底部刻度可将容量刻度调节到更精确的分度。 P 型 (Pipetman) 加样器是连续可调的、计量和移液的专用仪器，量度准确、操作安全。 P右下角数字为加样器最大容量值 ， 代表加样器的型号已标明在按钮上。 致密及粘稠液体对于密度低于水的液体，可将容量计的读数调到低于所需值来进行补偿。 例如：加样器转移10μl 血清。 先将读数调到 10μl ，吸取后以重量法测定。 如实测体积为 ，即偏差 ，则将读数调到 并重复一次。 如第二次仍不够准确，根据偏差再作调整。 排放致密或粘稠 液体时，宜在第一停点多等一两秒钟再压到第二停点。 预洗 25 当装上一个新吸嘴（或改变吸取的容量值）时应预洗吸嘴，先吸入一次液样并将之排回原容器中。 预洗新吸嘴能有效提高移液的精确度和重现性。 这是因为第一次吸取的液体会在吸嘴内壁形成液膜，导致计量误差。 而同一吸嘴在连续操作时液膜相对保持不变，故第二次吸液时误差即可消除。 吸液 首先选择一支合适的吸嘴安放在加样器套筒上。 使用大体积加样器（如 5000μl 以上）时必须在套筒上加插一过滤芯，稍加扭转地压紧吸头使之与套筒间无空气 间隙。 未装吸头的加样器绝不可用来吸取任何液体。 把按钮压至第一停点；缓慢、平稳地松开按钮，吸液样。 等一秒钟，然后将吸嘴提离液面。 用药用吸纸抹去吸嘴外面可能附着的液滴。 小心勿触及吸嘴口。 放液 将吸嘴贴到容器内壁并保持 100— 400 倾斜。 平稳地把按钮压到第一停点。 等一秒钟后把按钮压到第二停点以排出剩余液体。 压住按钮，同时提起加样器，使吸嘴贴容器壁擦过。 松开按钮。 按吸嘴弹射器除去吸嘴。 （只有改用不同液体时才需更换吸嘴。 ） 注意事项 PCR 实验室应备有 3 套连续可调式加样器 (— 10μl 、10— 100μl 、 100— 1000μl )，分别用于试剂准备、样品制备、 26 扩增及产物分析三个实验区，加样器在使用时应注意以下几点： 在取液前所取液体应在室温（ 15— 25℃）平衡；若吸液温度与室温不一致时将吸头预洗多次再用。 注意移液温度不得超过 70℃。 吸头浸入液体深度要合适，吸液姿势尽量保持不变。 在吸取液体时应缓慢匀速吸取，避免液体溅到加样器头上；打出液体后不应松开按钮，将吸头压掉后再将拇指松开，避免液体回吸。 在调整取液量的旋钮时，不要用力过猛，并注意计数器显示的数值不要超过其可调范围。 连续可调式加样器在取样加样过程中应注意吸嘴不能触及其它物品，以免被污染；吸嘴盒、废液瓶、所取试剂及加样的样品管应摆放合理，以方便操作过程、避免污染为原则。 改吸不同液体、样品或试剂前要换新吸嘴；发现吸嘴内有残液时要换新吸嘴。 新吸嘴使用前要预洗。 吸嘴内有液体时不可将加样器平放、倒转，以防液体进入加样器套筒内。 使用了酸或有腐蚀蒸气的溶液后，最好拆下套筒，用蒸馏水清洗活塞及密封圈；切勿用油脂等润滑活塞及密封圈。 连续可调式加样器在使 用完毕后应置于加样器架上，远离潮湿及腐蚀性物质。 27 ，组长对记录应及时检查、核实。 5． 每三个月对加样器进行清洗一次，先用 60%异丙醇擦洗，后用蒸馏水反复洗涤，去除异丙醇，晾干，在活塞处加一定量的润滑剂。 每年一次送质量技术监督局校准。 6． 当杯或加样器有可污染时，在 121℃ 压力下消毒 20 分钟。 各区的加样器归各区专用（有标识），清洁和消毒时分别处理。 28 十三、 Millipore 水纯化系统操作程序 1. 目的： 保证 Millipore 水纯化系统 的出水 质量。 2. 适用范围： 适用 Millipore 水纯化系统。 3. 操作步骤： 检查电源电压是否匹配后，并连接可靠地线。 Millipore 水纯化系统 放置在制备 区，要求环境清洁 无灰尘。 超纯水系统中的离子交换柱对有机物有一定的吸附容量，经过一定的处理量之后，应加以更换。 活性炭柱和空气过滤器应该根据处理水量进行定期更换。 使用纯水作为供给水，可以大大延长纯化柱的使用寿命。 避免在终端滤膜后连接硅胶管或其他软管来取水，以免水质受到污染。 终端滤膜应定期进行更换。 打开电源，使机器处于 pro operate状态，打开出水口开关，屏幕显示电阻率值为 ，提示为纯水，可以用于细胞培养液体的配制。 29 十 四 、组织块培养法 操作程序 一、目的 学习原代培养方法，从供体取得组织细胞后在体外进行的首次培养。 二、概述： 组织块培养法是常用的、简便易行且成功率较高的原代培养方法。 可以采用剪切法，即将组织块剪切成小块后，接种于培养瓶，组织小块贴壁 24h 或更长时间后，细胞就从组织四周游出。 但由于在反复剪切和接种过程中对组织块的损 伤，并不是每个小块都能长出细胞。 用于组织块培养的培养瓶可根据不同细胞生长的需要作适当处理，如预先涂以胶原薄层，以利于上皮样细胞等的生长。 组织块培养法特别适合于组织量少的原代培养。 （本节以新生牛主动脉平滑肌培养为例） 三、操作步骤 1. 取材：打开胸腔，用无菌的剪刀和镊子，无菌操作下取出主动脉胸段，浸到预先配制好的含双抗（ 500u/ml 青、链酶素）的 DHanks液中漂洗。 2. 组织的冲洗、修剪：取出主动脉，用 DHanks 液冲洗 3 次，用锋利的剪刀修剪除去周围组织，再用 DHanks 冲洗主动脉 3 次，除去血块等。 3. 平滑肌组织分离：纵向剖开主动脉，撕下主动脉内层，取主动脉中层的平滑肌组织，无血清 RPMI1640 漂洗 3 次。 30 4. 剪切：将平滑肌组织放入小烧杯，用锋利的眼科剪反复剪切组织至剪成 1mm3 小块，在剪切过程 中，可以适当向组织中滴加 1~2滴培养液，以保持湿润。 5. 贴块：用吸管吸取无血清培养液加入到烧杯，反复轻轻吹打片刻，静置数分钟，吸出上清，剩下的组织小块即可用于培养。 将剪。