分子生物学实验管理程序文件

分子生物学实验管理程序文件内容摘要：

核酸扩增标准程序 每次实验除了待检标本，还要包括一个阴性对照、一个阳性对照、一个阳性室内质控品。 PCR 仪电源开关，仪器自检完成后再进行下一步实验。 （仅适用于梯度 PCR 仪）：利用上下箭头选择“ option” 键→ “ enter” →根据所需要的温度选择 “ T” 和 “177。 ”温度，并用笔记下相应的温度梯度→“ exit” →选择“ stander” 程序→ “ enter” →编写相应的程序，并选择相应的温度梯度→“ exit” → “ save no” → “ exit” →打开仪器盖子，放入装有反应体系的 Eppendorf 管，盖上盖子，按“ start”键 →运行完相应程序→打开仪器盖子，取出 Eppendorf 管，盖上盖子→关机。 3. 编写 PCR 运行程序：利用上下箭头选择“ files” 键→ “ edit” → “ enter” →编写相应的程序→ “ exit” → “ save yes” → 用数字或字母编写相应的程序名称→ “ enter” → “ exit”。 34 PCR 运行程序：利用上下箭头选择“ files” 键→ “ load” → “ enter” →选择相应的程序→“ exit” → “ save no” → “ exit”→ 打开仪器盖子，放入装有反应体系的 Eppendorf 管，盖上盖子，按“ start” 键 →运行完相应程序→打开仪器盖子，取出Eppendorf 管，盖上盖子→关机。 4. 琼脂糖电泳检测 PCR 产物 35 十五、 PCR检测实验操作程序 1. 目的： PCR检测是整个临床基因扩增检验最主要的过程，为使该过程有序、在控，特制订本程序。 2. 范围： PCR 检测 样本处理、核酸提取、纯化、扩增产物分析整个过程。 3. 职责： 本程序由 PCR实验室工作人员负责执行。 4. 工作流程： 核酸提取、纯化、扩增、产物分析的具体操作见项目 SOP文件及仪器使用 SOP文件。 注：目前， SOP 文件的主要依据是生产厂家提供的检测试剂盒说明书。 核酸提取由 Trizol一步法在样本制备间完成。 提取和纯化后的核酸样品由传递窗转移至扩增间的模板添加工作区。 扩增反应体系的配制、分装在模板添加区完成后，由传递窗中取出待测样品，添加模板后，上机操作。 扩增程序的编程：日常检测活动中，操作者必须遵循仪器按SOP文件规定的路径，根据实验试剂盒要求和工作经验。 编程或修改路径参照仪器说明书；编程或修改的文件经临床 36 实验诊断中心主任审核批准后方能执行，原文件作废收回。 标本标识的传递： 检测过程中 以标本唯一性标识中的 “序号”为一一对应的“工作序号”进行传递。 试管或其它盖体分离的容器，检验号标识于管身上 1/3 处。 对于 Eppendoff 管，检验号标识于管盖。 扩增使用的反应板的标识、检验号由试管架上的标识传递到反应板上，并且一一对应。 工作安排：每 一项目每周至少完成一个批次的检测。 在移取所需体积的骨髓后，立即盖紧原始标本管盖，将标本继续保存于 4℃ 冰箱。 原始标本在检验分析结果报告后至少保存一周才能清除 . 如患者及医生对标本结果有异议，则需在检测一周内及时提出意见，以便重新检测复核结果。 37 十六、 PCR试验记录的管理 ： 检验资料是实验室质量证明资料及质量体系运作依据的重要组成部分。 为使资料的记录、保存状态在控，特制订本文件。 ： 本程序适用于实验过程中产生的数据、文本资料的记录和保存，主要有：病人 和标本信息、实验操作记录、实验检测结果、原始检测申请单和检测报告单、仪器使用记录等，实验记录包括电子记录和文本记录。 分区的专门文件夹中（如 D:\PCR），保存路径要清晰、便捷、易查找。 ：一整年的实验结果均保存在一个年度文件夹里，如“ 2020年”文件夹；每个年度文件夹又包含 12 个月文件夹，如“ 9 月”、“ 10 月”，每天的实验结果就保存在当月文件夹里。 件保存时以当天日期命名，如 2020 年 9月 10 日的保存为。 ，须保存多个 SDS 文件，命名时在后面以 a、 b、 c 等字母标识，如 2020年 9月 10 日做的两次实验，分别保存为。 、硬件故障等问题 38 导致实验结果丢失、无法查询等情况，每个月的实验结果记录文件都要用移动存储设备（如软盘、 USB硬盘等）拷贝到另一部 PC 机上做备份；一年的数据要用刻录机刻制一张 CD 光盘备份 储存，贴上标签，如“ 2020年实验结果备份”。 放入档案柜妥善存放。 ： ：在专用实验记录簿上记载，不同实验区的记录簿不得混用。 试剂贮存区记录检测所用的试剂盒情况（名称、批号、数量）和自配试剂记录；标本制备区记录检测标本数及在本区内进行的操作过程；在扩增及产物分析区记录质控结果和分析。 ，至少 2 年以上；其它实验记录保存于各自实验操作区内，至少保存 2 年以上。 ，需使用黑色墨 水笔，字迹清晰，不得随意涂改，如确需更改，应在原更改内容上划双线，填上新内容，并签名。 ，不得给他人借阅或复印（涉及医疗纠纷处理除外）。 在记录借出时需有实验室主管、经手人、借阅人的签名方可。 ，由实验室主管交科里统一保存。 ，要记录病人和标本信息，包括：病人姓名、性别、 39 年龄、 ID、检验单申请 ID 号、病区床号、检测项目、标本类型、标本状态、送检日期、标本接收人姓名等。 连同实验得到检测结果，当天工作结束前打印出当天的病人、标本 信息及检测结果汇总表，存档，保存至少 2 年以上。 40 十七、 PCR 检测结果的报告程序 1． 目的： 检测报告是检验过程的最终输出，为使报告的生成、发放、管理受控，特制订本程序。 2． 报告人： 赵李昊等。 3． 审核人： 潘晓东等。 4． 职责： PCR检验结果报告的审核、发放、管理、查询和意见的反馈。 将病例资料、样品资料、检测结果录入报告系统，产生结果报告单，经本室组长或 经相关培训后获得上岗资格的工作人员及 高年资检验人员审核签名后交工友送门诊和各病区。 5. 报告内容 科室名称 检测项目 样本接收和检验日期 病人的信息（姓名、性别、年龄、门诊或住院病区及床号） 检验方法（如 TaqMan荧光定量 PCR检测法） 结果 定性 检测项目检测阴性或阳性 定量 检测项目检测阳性、检测量为 检测人 对检测结果按标准要求作出报告。 签发日期、姓名。 41 专业负责人 对报告结果进行审核，审核日期、姓 名。 6． 工作流程： 要求：检测报告结果进入服务器保存，并涵盖满足临床随时查询、查询结果按本实验室操作。 在检验报告发生遗失的特殊情况下，查明发生问题的环节后，决定是否重新补发报告。 补发的报告应注明补发的原因，并在补发报告单上作补发记录。 在现有条件下，目前暂不考虑使用电子文件的形式发放检测报告，患者若有类似要求，可在标本送检时，提交与病历一致的通信地址，检验报告以挂号形式发出。 实验室在接受电话查询时，关于检验结果仅能回答 “某日送检的某个项目的检测已经完成（或未完成）。 结果请到服务台领取 ”，不得在无有效证据的情况下以任何方式提供诸如某人做过某项检查和 /或检测结果的信息（包括提示性、暗示性语言）。 本院或挂钩单位的医护人员工作查询除外。 7. 引用文件： PCR检测结果报告单见样单。 42 十八、试剂质检标准操作程序 负责人：陈必成 ： 保证每批用于临床实验的试剂质量良好，符合要求。 ： 各种用于临床实验的核酸扩增荧光检测试剂。 ，目测试剂是否处在冻存状态。 ：外包装（厂名厂址、检测项目、批准文号、批号和有效期等 ）；内包装（试剂瓶完整性、真空包装完整性、试剂品种完整性、使用说明书有否等）。 － 20℃冰箱保存。 将上述检测核对情况在记录本上登记。 ，按如下要求对新批号试剂进行校验实验 1。 1： 在使用前批次试剂进行常规实验的同时带上少量新批次的试剂。 用新批次试剂做阴性对照和阳性室内质控品，重复 5 次实验，若阴阳性及室内质控结果均正常的话，可初步通过验收。 若出现阴性涨、室内质控品不涨或结果偏差太大等情况时要求对新批号试剂进行校验实验 2。 2： ：空白对照、阴性对照、阳性对照各一，阳性标准品梯度（ 10 10 10 108）。 43 ，判断为试剂不合格，不能用于临床检测：。 如扩增曲线 CT 值大于 27，需重复实验确证试剂污染。 ，或阳性对照未检出而阳性标准品检出率大幅下降，表示试剂失效或检测灵敏度大幅下降。 ，阳性标准品检测正常，提示标本提取液可能存在问题。 重复新旧提取液 阳性对照实验，确定提取液失效问题。 更换提取液后该批试剂方可使用。 ，排除其他污染可能性后，提取液存在污染可能。 单独用提取液点样上机，出现扩增，需更换提取液后方可使用该批试剂。 对照检出，阳性标准品未检出或扩增曲线明显系统性 CT值偏大 5个循环以上。 提示阳性标准品存在问题。 更换阳性标准品后该批试剂方可投入使用。 44 十 九 、实验耗材的购买、质检和储存 程序 ： 保证耗材的使用质量，合理的配用及存放。 ： 核酸扩增荧光检测实验室常用耗材： 管、 离心管、 、带滤芯的吸头。 、质量规格报相关部门订货及购买。 ，验收合格即领取。 、定量地摆在实验台抽屉里，并标明品名及数量。 特殊的消耗品放在指定的地方。 ，应准确查询数量。 ，存放要小心，以免 损坏。 离心管 :检查离心管有无畸形、破损、不能闭盖的情况。 :每批随机抽样 离心管 50 个用于实验检测。 50 个目测合格的离心管盖好盖插在浮板上置于沸水浴锅中 20 分钟后取出，如发现有爆开情况发生，即认为该批离心管不符合本实验室实验要求，作退货处理。 50 个离心管加半量生理盐水后， 1 万转 /分离心 20分钟，如发现有管盖爆开或漏液情况发生，即认为该批离心管不符合本实验室实验要求，作退货处理。 ，即启用该批耗材。 45 离心管 方法、步骤同上。 检 查吸头有无畸形、破损。 :每批随即抽样吸头 50 个用于实验检测。 ，看有无吸孔堵塞、漏气现象发生，在排除移液器因素后，如有异常发现，即认为该批吸头不符合本实验室实验要求，作退货处理。 ，即启用该批耗材。 备注： 实验耗材在目测合格后基本上都可以初步通过验收。 如果在目测不合格或目测合格后出现甚至频繁出现爆管、堵塞、漏液、漏气等情况下，再由实验人员进行实验检测。 46 二十、实验室的清洁程序 责任人：郑建建 一、 目的：防止实验室内污染。 二、 范围：整个 PCR实验室。 三、 职责： PCR实验室人员必须明确造成污染的来源及处理办法。 四、 工作程序： 1. 实验前对各区空间，实验台面等及走廊进行紫外线消毒 30 分钟并做好记录。 2. PCR 室人员在操作过程必须戴手套、口罩、帽子。 3. 离心管在使用前要经高温消毒灭菌。 4. 未消毒的物品放置标本接收室，灭菌过的物品先放置试剂室，在灭菌有效期内由传递窗传至各区。 5. 已灭菌的离心管在取用时须用专用镊子夹取，不允许用手去拿。 6. 试验过程如发生液体外泻，应立即用浸有 10％次氯酸 钠溶液的卫生纸覆盖污染处半小时，再用浸有 75％酒精的软布擦拭干净，然后用移动紫外车紫外照射并记录。 7. 实验用过的 Tip头、离心管的处理见废弃物处理程序。 8. 每次工作结束后，用 75％的酒精清洁移液枪一次。 使用过的试管架，净化台，工作台面用 10％次氯酸钠擦拭 1 遍后，再用 75％的酒精清洁 1 遍，然后用紫外线照射 60min以上。 9. 各种用途的镊子应标明标识专项专用，用后应浸泡在 75%酒精中。 47 Tip 头等一次性材料污染，应立即更换应。 试验结束后对使用过的一次性手套口罩帽子应丢入 专用的垃圾袋中。 ，各区的地面需进行清洁，各区的清洁拖把、抹布等应严格分开使用并分开存放，清洁顺序按试剂室到扩增室进行。 ，应做好各区的清洁工作，然后做好实验后清洁消毒记录，并将各区的废弃物及垃圾袋密封后带出试验区，打开该区紫外灯进行消毒 60min以上。 13. 10％次氯酸钠每 1月配制一次， 75%酒精每周领取一次。