生物安全柜使用及维护手册

生物安全柜使用及维护手册内容摘要：

子时，则应对整个生物安全柜进行气体消毒。 （ 4）可能受生物因子污染的 生物安全柜，在移动到另一地方之前应适当地清除污染。 （ 5）在研究试剂溢漏或泼洒以后，受污染表面应适当地清楚污染。 ● 使用中的要求与规定 为确保实验室的安全，所有进入生物安全实验室的标本，都应该视为具有污染性的物质对待。 在作标本处理、标本接种、包装物或容器处理等接触具有传染性或潜在传染性的标本或容器时，必须在生物安全柜中进行。 标本接种一旦完成，将剩余部分标本用带帽密封的塑料管盛装，外面套好小塑料袋，作好标记，放入液氮罐内，标本在室温停留的时间应尽可能短。 而生物安全柜的使用应遵守以下要求。 （ 1） 生物安全柜的使用和 局限根据国家标准和相关文献通过本手册向每个操作人员说明。 每个操作人员都应熟悉本操作和安全手册。 在此，特别应指出的是，当发生泄漏、破损或操作失误时，生物安全柜是不能保护操作者的。 （ 2） 除非生物安全柜工作正常，否则不能使用。 （ 3） 生物安全柜在使用中，玻璃视窗高度超过安全高度报警器启动，提示此时安全柜对人是不安全的。 （ 4） 生物安全柜中的器材和设备应减少至最少。 后面的空气流通是绝不能阻断的。 所有物品在放入生物安全柜前，其表面最好经过消毒处理。 （ 5） 在生物安全柜 内 不能用本生灯。 原因是其产生的热量会破坏气流并损坏过滤装置，造成高效过滤 器的滤纸破损，引起泄漏。 可用电子“炉”，使用无菌的一次性接种环更好。 （ 6） 所有操作必须在工作区的中央或后部通过玻璃挡板可看见的地方进行。 （ 7） 尽量减少在操作者背后的走动。 （ 8） 操作者的手臂不可频繁出入生物安全柜，否则会打乱气流。 （ 9） 前面的气流不能被移液管等其他东西阻断，否则打乱气流可能会引起污染或操作者感染。 （ 10） 工作结束后以及每天下班前，应以适当的消毒剂擦拭生物安全柜的表面进行擦拭、消毒。 Ⅱ级 B2生物安全柜 11 （ 11） 开始工作前和结束工作后，生物安全柜的风扇应至少运行 5min。 ●其他事项 ⑴让操作者的眼睛在实验工作中感到舒服的最好方法为：将眼睛定 期离开安全柜的工作区域，休息一下，望一望远处的物体，同时得经常眨眼，保持眼睛的轻松并处于一个不紧张的状态。 经常检查眼睛，保持前窗和眼睛清洁。 ⑵调整光源让前窗不刺眼，尽量调到眼睛最为适应的位置。 ⑶合理安排本次实验中常用物品，尽量放在手边，在拿取或移动物品时用整个手臂，不要用手指够物品或弯手腕。 ⑷实验中使用喷灯时其火焰会严重影响在运行中的生物安全柜内的层流，有可能会实质性增加工作区域气溶胶的扩散。 如果喷灯的火苗很大，过量的热可能熔化HEPA 过滤器滤膜的黏结剂，甚至在滤膜上烧出洞而发生气体的泄漏，产生不安全 因素。 在Ⅱ级的 B2 型生物安全柜内，泄漏的气体可能达到爆炸极限。 如用电热套或可抛弃的加热环替代，不要烤容器瓶口，这种方法较为安全。 ⑸生物安全柜的主要目的是保护操作人员、环境和样品免受生物有害物质的侵害。 生物安全柜及其 HEPA 过滤器滤膜应使用对在生物研究中常用化学品表现惰性的材料，但其仍可能会被排风柜中常用的腐蚀性化学品破坏。 ⑹生物安全柜只在正确使用的情况下才能保护操作人员和样品，因此，在生物安全柜里实验操作结束后都得及时消毒、灭菌。 ⑺紫外灯只是个附件，用于减少安全柜不用时工作区域的污染。 紫外线实质上没有 穿透力不会杀灭被灰尘或有机物保护的微生物。 避免污染的最好方法是在每一段工作开始前和结束后对工作面定期清洁。 不能简单认为使用紫外灯，就不必清洁工作区域了。 ⑻生物安全柜工作区域放置大物体会妨碍气流，降低生物安全柜的效率。 比如离心机、搅拌机等电器通常有冷却风扇，这样将会破坏生物安全柜内的气流。 离心机内最好使用密封的安全杯，可以在生物安全柜内装样和下样。 ⑼某些应用，如研究生物毒素药物的工作，为防止有害物质逃逸。 一般建议连续使用生物安全柜。 而大多数应用连续使用生物安全柜，会降低 HEPA 过滤器滤膜的寿命。 ⑽让生物 安全柜连续工作，假设房间密闭，没有通风系统，没有什么活动，循环式的 A 类生物安全柜可能会把空气净度将至 100 等级。 事实上是不可能的，一旦使用人员进入房间进行操作，室内空气将会被污染。 同时这样做只会降低 HEPA过滤器滤膜的寿命。 ⑾ HEPA 过滤器滤膜应在压力差过大时更换。 决定滤膜寿命的两大因素是房间内空气污染的程度以及安全柜工作的时间，按时间表更换滤膜而不考虑滤膜被污染的程度可能造成不必要的浪费。 █ 生物安全柜的消毒 Ⅱ级 B2生物安全柜 12 ●表面消毒 工作完成后，所有的容器和设备应进行表面消毒后取出安全柜。 一天的工作结束后， 生物安全柜最后的表面消毒工作应包括工作台面的擦拭、生物安全柜内两侧和后壁的擦拭、观察窗玻璃内侧壁的擦拭。 如有必要，应对生物安全柜进行放射性监测和灭菌。 应以避免沾染皮肤及产生气溶胶的方式脱去手套和工作服。 安全的微生物操作程序的最后步骤，是要求操作者洗手。 生物安全柜内发生少量喷溅，应立即用吸水纸巾清楚，放入生物危害灭菌袋。 应尽快对喷溅物沾染到的物品和安全柜内表面用浸透消毒 液 的毛巾浸湿。 消毒工作面后，更换手套，再将清洁的吸湿巾放入柜内。 无论脱手套或是换手套时都应洗手。 大量的溢出可能导致溢出液流入前格栅和后格 栅，这时需要更广泛的消毒，柜中所有的物品都应进行表面消毒后移出柜外，要向工作台面上倾倒消毒液使其流入格栅到达排水托盘。 一般认为与消毒剂接触 2030ｍｉｎ就可以达到理想消毒效果，但这个时间依消毒剂和微生物种类而异，应遵照生产商的指导操作。 排水盘内收集的液体应装入盛有消毒剂的收集瓶中。 将一根软管连接到排水阀门，管子要有足够长度以保证其另一端浸没在收集瓶内消毒液液面之下，这样做可减少气溶胶的产生。 然后用水冲洗排水盘，再卸下排水管。 如果溢出液含放射性物质，也按类似程序处理。 同时，应进一步与辐射安全人员联系寻求 专业指导。 ●空气消毒 进行 HEPA 过滤器更换或内部维修之前，对进行过传染性材料操作的生物安全柜必须进行消毒。 生物安全柜重新安放之前，必须对柜内操作的病原体进行危险评估，决定是否要消。 尽管最近过氧化氢蒸汽已成功运用于生物安全柜的消毒，但最常用的方法还是甲醛蒸气灭菌。 这种对环境无害的蒸气可用于消毒 HEPA 过滤器、隔离间、离心机附件。 （消毒方法见附录） █ 生物安全柜的维护 生物安全柜的设计可以允许每天 24ｈ工作，连续工作有助于控制实验室中灰尘和颗粒的水平，但也会降低过滤器使用寿命。 在开始工作以前以及完成工作以后 ，至少要使安全柜工作 5ｍｉｎ来“净化”生物安全柜，亦即要留出将污染空气从生物安全柜中排出的时间。 生物安全柜的所有维修工作应该由有资质的专业人员来进行。 在生物安全柜操作中出现的任何故障都应该报告，并应在再次使用生物安全柜之前先进行修理。 ●紫外灯 生物安全柜中不需要紫外灯。 如果使用紫外灯的话，应该每周进行清洁以除去可能影响其杀菌效果的灰尘和污垢。 在安全柜重新认证时，要检查紫外线的强 Ⅱ级 B2生物安全柜 13 度以确保有适当的发光射量。 房间中有人时一定要关闭紫外灯，以防止眼睛和皮肤不慎暴露而造成伤害。 ●明火 在生物安全柜内形成的几乎 没有微生物的环境中，应避免使用明火。 明火会对气流产生影响，并且在处理挥发性和易燃物品时，使用明火也危险。 在对接种环进行灭菌时，可以使用微燃烧器或电子“炉”，而不应使用明火。 ●溢洒 实验室中要张贴处理溢洒物的实验室操作规程，每一位使用实验室的成员要阅读并理解这些规程。 一旦在生物安全柜中发生生物危害物品溢洒时，应在生物安全柜处于工作状态下立即进行清理。 要使用有效的消毒剂，并在处理过程中尽可能减少气溶胶的生成。 所有接触溢洒物品的材料都要进行消毒和或高温灭菌。 ●清洁和消毒 由于剩余的培养基可供微生物生长，因 此在实验结束时，要将包括仪器设备在内的生物安全柜里的所有物品都进行表面净化，并移出安全柜。 在每次使用前后，要对生物安全柜的内表面进行净化。 工作台面和内壁要用消毒剂进行擦拭，所用的消毒剂要能够杀死生物安全柜里可能发现的任何微生物。 在每天实验结束时，最终的表面净化处理应包括擦拭工作台面、四周以及玻璃的内外侧等部位。 在对目标生物体有效时，可以采用漂白剂溶液或 70％酒精。 在使用如漂白剂等腐蚀性消毒剂后，还必须用无菌水再次进行擦拭。 推荐将生物安全柜维持在运行状态。 如果要。