20xx-20xx年微生物学检验复习题

20xx-20xx年微生物学检验复习题内容摘要：

种 检测方法 纸片扩散法（ KB 法） 肉汤稀释法 琼脂稀释法 琼脂筛选法 浓度梯度法 自动化药敏检测 DNA 探针杂交 PCR 技术 淋病的 确诊应如何进行微生物学检查 答：先培养 :即疑为淋病奈瑟菌感染的标本接种于选择培养基如 NYC、 MTM、 ML，立即置于 5％ CO2 气体条件下 35~37℃孵育，培养基需观察 72 小时后无菌生长可报告为阴性，每隔 24 小时观察，淋病奈瑟菌的菌落呈灰褐色、光滑、半透明呈露滴状凸起的菌落。 然后进行革兰染色镜检 :将菌落涂片，革兰染色后显微镜下见革兰阴性双球菌，再进行氧化酶和触酶试验，葡萄糖发酵试验阳性，其他糖类试验阴性于是可确诊为淋病奈瑟菌。 2链球菌是如何分类和鉴定的。 链球菌的分类：根据溶血现象分类：甲型溶 血性链球菌、乙型、不出现溶血的丙型。 根据 Lancefield 抗血清分型将分为 ABCD… ..等 20 个群。 对人类治病主要是 A 群。 鉴定：羊血脂平板识别溶血特性，涂片格兰染色，镜检，如果为 G+，进一步做触酶试验， %的 NaCL 不生长着，可确定为链球菌细菌。 2肺炎链球菌致病因素及鉴定要点，如何区分肺炎链球菌与草绿色链球菌。 肺炎链球菌的致病因素：肺炎链球菌的荚膜在细菌的侵袭力上起着重要作用；肺炎链球菌的溶血素、神经氨酸酶也是其主要致病物质 鉴定要点：发酵葡萄糖和多种糖，不产 气，乳酸为代谢终末产物，触酶阴性，胆汁溶菌试验和 Optochin 阳性。 a 溶血性链球菌。 荚膜多糖使菌落呈粘液状；可产生自溶酶，培养 48h 后出现“脐窝状”菌落。 对青霉素耐药甚至多重耐药。 如何区分肺炎链球菌和草绿色链球菌：肺炎链球菌： Optochin 为 S，胆汁溶菌试验阳性。 草绿色链球菌： Optochin 为 R，胆汁溶菌试验阴性。 2肠杆菌科细菌有哪些共同的生物学特性。 如何区分肠杆菌科细菌与其他革兰阴性杆菌。 答： 共同的生物学特性： 1. 形态与染色： G –杆菌，多数有周鞭毛、有荚膜或微荚膜，致病菌株多数有菌毛 ，均无芽胞，多数有动力。 培养：需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在普特培养基上和 MAC 上生长良好。 生化反应： 氧化酶－；发酵葡萄糖（产酸或产酸产气）；触酶＋；硝酸盐还原试验＋ 发酵多种糖类，多数能发酵乳糖，产酸产气 ★利用乳糖发酵试验初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌： 肠道致病菌→多数不发酵乳糖 肠道非致病菌→多数发酵乳糖 抗原构造复杂：鞭毛抗原（ H）、 K 或 Vi 抗原、菌体抗原（ O） 抵抗力不强，加热 60℃ 30min 即被杀死，不耐干燥，对一般化学消毒剂如漂白粉、酚、甲醛等均敏感。 对低温有耐受 力，能耐胆盐，并在一定程度上能抵抗染料的抑菌作用。 易变异：通过接合、转导、溶源性转换引起耐药性变异、毒力性变异、生化反应性变异 临床意义： ☆致病物质：菌毛、表面抗原、内毒素、肠毒素 ☆传染途径：肠道传染、肠道外传染 ☆所致疾病：○肠道致病菌引起肠道传染病（细菌性痢疾、伤寒等） ○条件致病菌：是医院感染的主要病原菌 肠杆菌科细菌与其他革兰阴性杆菌区分 肠杆菌科细菌与其它 Gb 鉴定要点 : 肠杆菌科 弧菌科 非发酵菌 O/F（葡萄糖） F F O/ 氧化酶 + + 形态 杆状 弧形 杆状 鞭毛 周毛或无 单毛 单、丛、周或无 2哪些是主要引起人类肠道感染的肠杆菌科细菌。 埃希菌属，志贺菌属，沙门菌属，耶尔森菌属。 2如何进行肠杆菌科细菌的微生物学检验。 答 :尿液标本 1 首先是直接图片染色 ,给出初步报告 2 接种在 BAP 和 MAC 上 ,35℃培育箱中培育 18～ 24 小时 3 培育好后 ,做涂片染色 ,和氧化酶实验 .然后转种到 KIA和 MIU 上以及 O/F,37℃培育 18～ 24 小时 . 4 然后观察结果，全面生化鉴定和血清学分型 5 药敏试验 注 :1 血清和脑脊液标本需要先增菌 ,然后做 1～ 4 步 2 粪便呕吐物的分离培养是在 (SS/HE/XLD和 MAC/EMB/中国蓝 )上边进行 ,然后同尿标本 以上实验步骤为肠杆科菌属的检验程序 报告依据 : ⑴ 革兰阴性无芽孢杆菌 ⑵ O/F 为发酵型 ⑶ 吲哚 /甲基红 /VP/枸橼酸盐 (IMVC) ⑷ MAC 上面的菌落 ⑸ KIA 实验的结果 肠杆菌的定科主要依靠 O/F 实验和氧化酶实验，以及菌的形态和有无鞭毛（有鞭毛的细菌才具有致病性）来定。 属种的鉴定可以用自动仪和商品鉴定盒来定。 手工操作结果判定各种属特点： 大肠埃希氏菌 ：在选择性平板上课发酵如糖，形成有色菌落： EMB 上市粉红色有金属光泽； MAC 上粉红或红色； HE 上中度抑制，菌落呈橙红色或橘红色； SS 上受抑制，菌落呈粉红色或者中间粉红色，周围无色； XLD 上市不透明的黄色。 KIA 上为 AA+,(上下产酸产气， H2S 阴性 )MIU（动力 /吲哚 /尿素） ++. IMVC++ 沙门菌属 ： KIA 结果可能为葡萄糖分解阳性，乳糖分解阴性，有的产气，有点不产气，有的 H2S 阳性 有的阴性。 MIU+； IMVC:+或者 ++。 沙门菌属的血清学鉴定中， H 血清分型如果第二相不凝，可能是位相诱导 . 志贺菌属 ：无鞭毛，在增菌培养是在 GN 肉汤上， 37℃培养 4 到 6 小时即可。 KIA 上，产碱 /产酸、不产气、 H2S 阴性； MIU(+/),IMVC上（ +/） +。 血清定型原则是先多价，后单价，需对照。 小肠结肠炎耶尔森菌 ：粪便标本在增菌时采用冷增菌培养， 4～ 5℃培养 2 到 3 周。 25℃动力阳性， 37℃动力阴性。 尿素阳性 克雷伯菌属 ：对氨苄西林天然耐药，对头孢容易耐药。 肠杆菌属 ： IMVC 结果与大肠埃希氏菌属相反，为 ++,动力和鸟氨酸均阴性。 变形杆菌属 ：周身鞭毛， H2S 阳性，同种间的鉴定，普通变形杆吲哚阳性，普通变形杆与豪氏主要依靠七叶苷和水杨苷实验，前者两项为阳性，后者为阴性，奇异变形杆的特点是鸟氨酸阳性，产黏变形杆是木糖发酵阴性，潘氏变形杆是氯霉素耐药。 2变形杆菌、 小肠结肠炎耶尔森菌 鉴定要点 变形杆菌 G 杆菌 普琼：有迁徙现象。 SS： 中心呈黑色 氧化酶 尿酶 + KIA： KA++ 小肠结肠炎耶尔森菌 G杆菌 CIN：菌落为粉红色，偶有一圈胆盐沉淀 氧化酶： 尿酶 + KIA： KA TSIA： AA 血清定型 2不发酵革兰阴性杆菌的共同特点是什么。 临床常见菌属有哪些。 答 : 1 培养 在一般培养基上生长良好，包括血平板，巧克力平板。 2 革兰染色 革兰阴性杆菌。 3 氧化酶实验大多为阳性。 4 O/F 为 O 型，不利用或产碱（ N/F）。 5 KIA 斜面穿刺生 长不良，底层穿刺上可生长 ，斜面及底层均呈碱性生长。 6 动力实验在半固体中仅在穿刺的 4mm 左右生长， 46h 初步观察，时间久了动力消失。 临床常见菌属有假单胞菌属，不动杆菌属，产碱杆菌属，黄杆菌属，莫拉菌属，军团菌属。 2产碱杆菌、不动杆菌属鉴定要点 产碱杆菌属：在 MAC 、 SS 平板上可形成无色透明的菌落，在血平板上行成灰色，扁平，边缘薄的较大菌落。 生化鉴定：氧化酶及触酶（ +）、 O/F 产碱性、脲酶（ — ）、动力（ — ）不液化明胶、不分解任何糖类 不动杆菌属：在普通培养基和麦康克平板上生长良好，最是温度为 35 度，有些菌株可在 42 度生长，在 SS琼脂平板上有部分菌落生长， 生化鉴定：氧化酶（ — ）、动力（ — ）、硝酸盐实验 (— ) 2铜绿假单胞菌的主要生物学特性 1）、形态特征：为格兰阴性菌，长短不一，球状或长丝状，成双或成锻炼排列。 一端有鞭毛，运动活泼，无芽孢。 可产生多种色素，如绿脓素与带荧光的水溶性荧光素。 2）、培养特性：专性需氧菌，部分菌株能在兼性厌氧条件下生长，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，可生长的温 度范围为 25— 42 摄氏度，最适生长唯独为 25— 30 摄氏度， 4 摄氏度不生长。 氧化酶阳性，氧化分解葡萄糖、木糖、产酸不产气，液化明胶，还原硝酸盐并产生氮气，吲哚阴性，利用枸橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性。 3)、有 O 抗原和 H 抗原，其中 O 抗原包含外膜蛋白，脂多糖两种成分。 外膜蛋白是保护性抗原，脂多糖具有特异性，应用抗原成分可对铜绿假单胞菌进行血清学分型，目前可分为 20 个血清型。 革兰阴性杆菌鉴定步骤 见书 3革兰阳性球菌鉴定步骤 见书 3细菌实验室应如何检验疑为霍乱的粪便标本。 粪便标本：（ 1） a 涂片 b动力制动试验 ===快速检测→初步报告 （ 2）接种碱性胨水 （ 25℃ 68 小时）→转钟 a TCBS 或 4 号琼脂 — 35℃ 1218小时→观察可疑菌落。 （ 3）生化鉴定： a涂片 染色（菌体短小 弯曲成弧形或直杆状的革兰阴性细菌） b氧化酶试验（ +） c粘丝试验（ +） d O/129敏感试验 （ s） e O1 群， O139群血清凝集实验（ +） （ 4）分纯：转钟 KIA→生化鉴定： a 耐盐性试验 NAcL【 0%（ +） 1%（ +） 3%（ +） 6%（ +） 8%（ ） 10%（ ） 】 ； b 血清型鉴定； c 生物型 鉴定 3简述结核分枝杆菌的形态及培养特性（培养基） 答：形态：细长略弯曲的杆菌，有时可见啊分枝状，无芽胞和鞭毛，因衰老和抗结核药物的作用可出现多种形态，如球状、串珠状或丝状。 培养特性：在固体培养基上，菌落为粗糙型，表面干燥呈颗粒状，不透明，乳白色或淡黄色，如菜花样。 在液体培养基中，生成菌膜。 如在培养液中加入吐温 80 可是细菌分散，均匀生长，有毒株的在液体培养基中呈索状生长。 3如何进行结核分枝杆菌的微生物学检验。 形态观察 （ 1）、涂片：直接涂片和厚涂片；火焰固定后用于染色 （ 2）、 染色： ○ 1 抗酸染色 报告抗酸杆菌 ○ 2 荧光染色 报告分枝杆菌 分离培养 （ 1）、标本处理：脑脊液等无杂菌污染的标本可直接或离心后取沉渣接种；痰和尿液有杂菌污染的标本接种之前应作适当的处理。 ○ 1 酸处理，待接种； ○ 2 碱处理，待接种； ○ 3 胰酶 — 新洁尔灭法，待接种 （ 2）、接种与培养 1）固体培养基： ○ 1 抗酸性染色 ○ 2 鉴定试验 鉴定报告群别或种别 ○ 3 耐药试验 2）液体培养基： 鉴定报告群别或种别 生化反应 糖发酵 触酶 热触酶 中性红 碲盐还原 + + 基因诊断： ○ 1 DNA 探针 ○ 2 PCR 杂交梳 鉴定报告群别或种别 ○ 3 16rRNA 基因测序 免疫学诊断： ○ 1 结核菌素试验 辅助手段 ○ 2 检测抗 PPD IgG 诊断活动性结核 ○ 3 全血 INFγ 测定 报告群被或种别 3厌氧芽胞梭菌属共同特征，主要种类。 共同特征：厌氧或微需氧的粗大芽孢杆菌。 革兰阳性，芽孢呈圆形或卵圆形，直径大于菌体，位于菌体中央，极端或次极端，使菌体膨大呈梭状。 多数为腐生菌，少数致病菌，能分泌外毒素，和侵袭酶类，引起人和动物致病。 种类：临床上有致病性的梭状芽孢杆菌主要是某些厌氧芽孢杆菌，如破伤风梭菌，产气荚膜梭菌，肉毒梭菌与艰难梭菌等。 3破伤风梭菌、肉毒梭菌的形态特征、致病物质及所致疾病 破伤风撵梭菌的（形态特征）：革兰氏阳性菌、细长、周身鞭毛、能运动、无荚膜。 芽孢正圆形，比菌体大，位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状。 专性厌氧菌，在 血平板上呈薄膜状生长，菌落半透明、灰白色、边缘疏松呈羽毛状，伴 β 溶血。 在疱肉培养基中，肉渣部分消化，微变黑，有少量气体，有腐败性恶臭。 （致病物质）：外毒素。 （所致疾病）：感染后引起机体强直性痉挛、抽搐，称为破伤风。 肉毒梭菌的（形态特征）：革兰阳性粗短杆菌、单独或成双排列。