国标-梅毒诊断标准

国标-梅毒诊断标准内容摘要：

暗视野显微镜、钝刀 (刮勺 )、载玻片、注射器、注射针头、无菌等渗盐水。 A． 3取材 A． 3． 1 皮肤黏膜损害取材：首先在载玻片 (厚度为 1． Omm～ 1． 2mm)上滴加 50ttI，～ 100ttI。 盐水备用。 然后用棉拭子取无菌盐水轻轻擦去皮损上的污物。 如皮损上有痂皮，可用钝刀小心除去。 再用钝刀轻 轻地刮数次 (避免出血 )，取组织渗液与载玻片上的盐水混匀，加盖玻片置暗视野显微镜下检查。 A． 3． 2淋巴结取材：消毒淋巴结表面皮肤，用无菌干棉球擦干。 用 lml，无菌注射器配 12号针头，吸 取无菌等渗盐水 0． 25mL～ 0． 5mI。 ，以无菌操作穿 刺淋巴结并注入盐水，再吸人注射器内，反复 2～ 3次 后，取少量淋巴液于载玻片上，加盖玻片，置暗视野是微镜下检查。 A． 4方法 A． 4． 1在暗视野聚光器 (此法用湿系暗视野聚光器 )上加一滴甘油缓冲液 (甘油和 0． 1mol／ L PBS， pH 7． 0按 7： 3配制 )。 A． 4． 2载玻片置载物台上，上升聚光器使甘油缓冲液接触载玻片，先用 10倍物镜，使物像清晰，再用 40倍物镜观察，寻找有特征形态和运动方式的梅毒螺旋体。 A． 5结果及解释 A． 5． 1暗视野显微镜下，典型的梅毒螺旋体呈白色发光，其螺旋较密而均匀。 运动规 律，运动性较强， 其运动方式包括： ① 旋转式，围绕其长轴旋转； ② 蛇行式，全身弯曲如蛇行； ③ 伸缩其螺旋间距离而移动。 观察其运动形式有助于与其他螺旋体相鉴别。 A． 5． 2未检出螺旋体不能排除梅毒的诊断，阴性结果可能说明： ① 螺旋体数量不足 (单次暗视野显微 镜检查阳性率小于 50％ )； ② 患者已接受抗生素或杀灭梅毒螺旋体的药物治疗； ③ 损害接近自然消退； ④ 损害不是梅毒。 ～ WS 273—2020 附录 B (规范性附录】 梅毒血清学检查 当人体感染梅毒螺旋体后 4周～ 10周左右，血清中可产生一定数量的抗类脂质抗原的非特异性反 应素 (主要是 lgM、 IgG)和抗梅毒螺旋体抗原的特异性抗体 (主要是 IgM、 IgG)。 这些抗体均可用免疫 学方法进行检测。 血清学检查是辅助诊断梅毒的重要手段。 根据检测所用抗原不同，梅毒血清学试验分为两大类：一类为非梅毒 螺旋体抗原血清试验，包括 VDRI。 玻片试验、 USR玻片试验、 RPR试验、 TRUST试验，这些试验主要应用于梅毒的筛查和疗效观 察。 另一类为梅毒螺旋体抗原血清试验，包括 TPHA试验、 TPPA试验、 FTAABS试验、E1． ISA试验 等。 这些试验主要用于确证试验，不用于疗效观察。 B． 1 非梅毒螺旋体抗原血清试验 B． 1． 1原理 梅毒螺旋体一旦感染人体，人体迅速对被损害的宿主细胞以及梅毒螺旋体细胞表面所释放的类脂 物质作出免疫应答，在 3周～ 4周产生抗类脂抗原的抗体 (反应素 )。 这些抗体主要是 IgG和 IgM型 混 合抗体。 非梅毒螺旋体抗原试验是使用心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原的絮状凝集试验。 反应素与 心磷脂形成抗原抗体反应，卵磷脂可加强心磷脂的抗原性，胆固醇可增强抗原的敏感性。 心磷脂、卵磷 脂遇水形成胶体溶液，胆固醇遇水形成结晶。 当抗原与抗体 (反应素 )混合发生反应时，后者即粘附胶体 微粒的周围，形成疏水性薄膜。 由于摇动、碰撞，使颗粒与颗粒互相粘附而形成肉眼可见的颗粒凝集和 沉淀，即为阳性反应。 如遇到非梅毒血清，因体液中的白蛋白多于球蛋白，而白蛋白对胶体颗粒有保护 作用，形成亲水性薄膜，即使同样摇动、碰撞，由于抗 原颗粒周围没有粘附免疫球蛋白的作用，不能形成 较大颗粒，无肉眼可见的凝集和沉淀，因此为阴性反应。 VDRL、 USR、 RPR和 TR UST等试验均为此 类试验，它们所采用的抗原成分相同，敏感性和特异性基本相似。 B． 1． 2 VDRL玻片试验 B． 1． 2． 1材料 a． VDRL试剂盒：含 VDRL抗原 (o． 5ml， )； VDRI。 缓冲液， pH 6． 0177。 0． 1，其配方为中性福尔马林 0． 5m I。 ， Na： HP O。 0 ． 0379， KH2P(X 0 ． 179， NaCl 10． 09，蒸馏水 l 000mI．；标准针头 (60q1滴／ml， )，直 径 14mm漆圈玻片； VDRI。 试验结果图片。 b．其他： 0． 85％ NaCl溶液 (等渗盐水 )；可调水平旋转器。 B． 1． 2． 2 VDRI。 抗原配制方法： a．吸取 0． 3mI． VDRL缓冲液置 30mL小瓶； b．吸取 0． 3mI，VDRI．抗原迅速滴入小瓶内 VDRL缓冲液中 (约 4s)，随后摇动 10s，使之混匀； C．立即加 2． 4mL VDRL缓冲液，盖上瓶盖，来回颠倒摇动小瓶 10s约 30次，即为 VDRI．抗原，此 抗原只能用 1d。 B． 1． 2． 3定性试验 a．血清标本需 56℃ 灭活 30min备用； b．吸取 0． 05mL血清放人玻片圈内，将血清涂开至整个圈内； c．用标准针头加入 1滴抗原； d．将玻片置旋转器上摇动 4min， (180177。 5)次／ min，立即置 10显微镜下观察。 B． 1． 2． 4定量试验 经 VDRL定性试验为阳性、弱阳性，可疑反应或阴性但临床怀疑为梅毒者，需做定量试验，前者需 WS 273—2020 明确抗体滴度，后者为排除 “前带现象 ”。 a．在反应板 18孔各加等渗盐水 0． 05mI．； b．吸取 0． 05mL血清标本 (血清已灭活 )置第 1孔与等渗盐水混匀，吸取 0． 05mI。 稀释液至第 2孔 混匀，再吸取 0． 05mL至第 3孔，如此连续稀释至第 8孔，弃 0． 05mL稀释液。 稀释度为原倍、 1： 1： 1： 1： 1 1： 3 1： 6 1： 128，必要时可 稀释至更高倍数。 C．每个稀释度加入抗原 l滴； d．旋转速度和时间同定性试验。 B． 1． 2． 5结果 大或中等大小的絮状物，液体清亮： 3+～ 4+强阳性反应； 絮状物较小，液体较清亮： 2+阳性反应； 絮状物较小，均匀分布，液体混浊： 1+弱阳性反应； 抗原颗粒稍粗，无凝集： 177。 可疑； 抗原颗粒均匀，针状细小：一阴性反应。 B． 1． 3 RPR环状卡片试验 B． 1． 3． 1原理 RPR试验是 VDR L试验的一种改良方法。 该法是在抗原中加入活性炭颗粒作为指示物，加入了 氯化胆碱，因此血清不需灭活。 特制的白色纸卡替代 了玻片。 试验结果易于判断，肉眼即可观察。 也可 用血浆进行检测，试验结果可保存。 抗原放 4℃ 冰箱可保存 1年。 B． 1． 3． 2材料 a． RPR试剂盒：含 RPR抗原；直径为 18ram圆圈的特制白色反应卡片；标准针头 [(60177。 1滴／ mI． )]； RPR试验结果图片。 b．其他：可调水平旋转器。 B． 1． 3． 3定性试验 a．吸取 0． 05mL血。