bdfacscalibur中文操作手册cellquest软件

bdfacscalibur中文操作手册cellquest软件内容摘要：

探测器（电压）。 若必要，将这群细胞调在所有图的左下角。 用于同型对照的抗体为小鼠 抗钥 孔嘁血蓝素（ KLH）。 当用于测定人的细胞时，所发生的结合是非特异结合。 抗体的这种非特异结合现象是由于抗体的 Fc端与细胞膜上的 Fc受体结合。 这和自发荧光 都是背景荧光。 特定抗体 Fab端与细胞表面上特定抗原的特异结合所发的荧光为阳性荧光。 若必要，用同型对照管，在所有 荧光点图上调节 FL1/2/3的电压来调节背景荧光。 1．选择点图 2．在出现的对话框内选择 X轴： FL1， Y轴： FL2 3．选择 G1=R1 4．点击 OK， FL1/FL2的点图出现 5． 点击 FL1/FL2点图的边框并将之拖至 FSC/SSC图的右侧 6．同样建立一个 FL3/FL2的点图，并选择 G1=R1。 如获取 4色样本，进行下一步。 如获 取 3色样本，跳至第 8步。 7．同样建立一个 FL3/FL4的点图，并选择 G1=R1。 若无 FL4参数，请确认Detector/Amps 窗口中 Four color 前是否选中。 8．在工具板中选择象限标尺 ,在 FL1/FL2点图上 以同型对照管的门内细胞画象限 , 这些象限指定了阴性 /阳性区域。 9．点击 FL1/FL2点图，拖动 Marker的柄将 它设定在 101处。 10．从 Status窗口选择 Quadrant Stas（象限统计）。 11．在其余的图上，重复 810步。 12．插上同型对照管 13．点击 Aqusition Control窗口中的 Restart。 14．若必要，调节 FL FL2的电压（在 Detector/Amps 窗口中），使这群细胞调在所有图的左下角。 BD FACSCalibur 中文培训手册 3585898611dcd89f17284c7e79f1eb6e Page 5 13 15．若必要，调节 FL3的电压（在 Detector/Amps 窗口中），使这群细胞调在所有图的左下角。 注意：勿调节 FL4的 PMT电压，其电压值有 FACSComp设定。 16．点击 Aqusition Control窗口中的 Pause。 17．移去同型对照管。 18． 关闭 Detector/Amps 和 Threshold窗口 5． 6． 7 调节荧光补偿 优化的最后一步是调节光谱重叠。 若 3色样本，必要时需调节 FL2%FL1， FL1%FL2，FL3%FL2， FL2%FL3的补偿。 若 4色样本，必要时需也要调节 FL3%FL4， FL4%FL3。 选择适当的试剂用来调节补偿很重要。 每种荧光素的补偿应用染色最强的细胞群来 设置。 如一个 Panel中有： CD3FITC、CD4FITC、 CD8FITC，则 FITC的补偿应用 CD8FITC来设置。 补偿的调节依赖于由同型对照管设定的探测器电压。 一旦电压设定，补偿用单阳性管调节。 1．从 Cytometer 菜单中选择 Compensation 2．插上 CD3FITC/小鼠 IgG1PE/小鼠 IgG1PerCP/小鼠 IgG1APC管。 3．点击 Aqusition Control窗口中的 Restart。 4．若必要，调 节 FL2%FL1使 FITC+细胞在 FL1/FL2点图的右下象限。 5．移去此管，插上小鼠 IgG1FITC/CD8PE/小鼠 IgG1PerCP/小鼠 IgG1APC管。 6．点击 Aqusition Control窗口中的 Pause、 Restart。 7．若必要，调节 FL1%FL2使 PE+细胞在 FL1/FL2点图的左上象限。 8．若必要，调节 FL3%FL2使 PE+细胞在 FL3/FL2点图的左上象限 9．移去此管，插上小鼠 IgG1FITC/小鼠 IgG1PE/CD45PerCP/小鼠 IgG1APC管。 10．查看 FL2%FL3的补偿，应为 %,若必要，调节该补偿。 若作 3色，跳至 14 步。 11．查看 FL4%FL3的补偿，应为 %,若必要，调节该补偿。 12．移去此管，插上小鼠 IgG1FITC/小鼠 IgG1PE/小鼠 IgG1PerCP/CD4 APC管。 13．查看 FL3%FL4的补偿，应为 %,若必要，调节该补偿。 14．关闭 Compensation窗口。 15．点击 Aqusition Control窗口中的 Pause、 Abort。 16．移去样本管，插 上双蒸水管。 17．将仪器处于 Standby状态。 BD FACSCalibur 中文培训手册 3585898611dcd89f17284c7e79f1eb6e Page 5 14 5． 7 实验练习： 3色 /4色预获取 在此练习中，您将：  设定 Acquisition（获取）和 Storage（储存）的条件。  设定文件储存参数  创建试剂组合 5． 7． 1 设置 Acquisition amp。 Storage 窗口 在此窗口可设定获取和储存的颗粒数及类型。 也可设定储存的参数及其分辨率。 1．从 Acquire 菜单中选择 Acquisition amp。 Storage，出现 Acquisition amp。 Storage窗口 2．在 Acquisition Gate 中选择默认设置： Accept 、 All 获取的数据首先由获取的门处理，落在门内的所有颗粒被接受或放弃。 然后数据按 Collection Criteria 窗口中的设置处理。 3．在 Collection Criteria中选择默认设置： Event Count， 10000， All 可设置获取终止的条件： Event Count：获取的颗粒数 Time：获取时间 4．在 Storage Gate中选择默认设置： All 5．在 Resolution （分辨率）中选择默认设置： 1024 6．点击 Parameter Saved，出现对话框 7．若无第二根激光器，不选 P6（ FLXA）、 P7（ FLXW）。 只有被选参数才储存在 Data file中。 若 3 色分析， FSCH、 SSCH、 FL1H、 FL2H、 FL3H需储存。 BD FACSCalibur 中文培训手册 3585898611dcd89f17284c7e79f1eb6e Page 5 15 8．点击此对话框的 OK 9．点击 Acquisition amp。 Storage窗口的 OK 5． 7． 2 设置 Parameter Description 1． 从 Acquire 菜单中选择 Parameter Description，出现 Parameter Description对话框。 2．点击 Folder，出现对话框，选择或创建文件夹。 3．点击此对话框的 Select “ ”。 4．点击 Parameter Description对话框的 File ，出现文件名编辑窗口。 5．在 Custom Prefix中：输入文件名 6．在 File Name Suffix中选择 File Count 7．在 File Count 中：确认输入的为 1 BD FACSCalibur 中文培训手册 3585898611dcd89f17284c7e79f1eb6e Page 5 16 8．点击此对话框的 OK 9．在 Parameter Description对话框中输入您想保存的 Patient ID， Sample ID， Comments等信息。 10．选择 或 输入 所有参数名 选择：点击右侧的箭头，选择已设定的参数名。 输入：在 P1后的空格中输入参数名。 11．将 Parameter Description对话框拖至适当位置以不妨碍视野，勿关闭。 5． 7． 3 编辑 Reagent Panel 编辑 Panel允许您 将所定义的试剂进行组合，以便为实验的每管自动选择参数名。 可编辑 3色或 4色的 Panel。 3色 Panel： 小鼠 IgG1FITC/小鼠 IgG1PE/CD45PerCP CD3FITC/CD8PE/CD45PerCP CD3FITC/CD16+56PE/CD45PerCP 4色 Panel： 小鼠 IgG1FITC/小鼠 IgG1PE/CD45PerCP/小鼠 IgG1APC CD3FITC/CD8PE/CD45PerCP/CD4APC CD3FITC/ CD16+56PE/CD45PerCP/CD19APC 1． 从 Acquire 菜单中选择 Edit Panel，出现 Edit Panel对话框 2．点击 Panel 上的 Add， new panel 就出现在 Panel list 中，输入 panel 名 3．选择该 panel（变黑），点击 Tube 上的 Add， Tube1就出现在 tube list 中，输入 tube 名 BD FACSCalibur 中文培训手册 3585898611dcd89f17284c7e79f1eb6e Page 5 17 4．选择该 tube（变黑），在 label lis。