冻干粉针剂车间培养基模拟灌装验证方案

冻干粉针剂车间培养基模拟灌装验证方案内容摘要：

，≥ 10分钟干热灭菌。 灭菌后做无菌检查，应符合规定。 第 6 页 共 11 页 文件名称 冻干粉针剂车间培养基模拟灌装验证方案 文件编号 JBZYZ004A 《细菌内毒素检查标准操作规程》，每瓶用 20ml内毒素检查用水荡洗后做内毒素检查， 应≤。 ，应符合规定。 《细菌内毒素检查标准操作规程》，取胶塞 40只，加入 100ml内毒素检查用水震荡后，做细菌内毒素检查，应≤。 菌种：培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过 5 代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第 0代） ,并采用适宜的菌种保藏技术 ,以保证试验菌株的生物学特性，选择以下三种菌种（菌种来源：黑龙江省 食品 药品检验 检测 所） 金黄色葡萄球菌 [CMCC(B) 26003] 铜绿假单胞菌 [CMCC(B) 10104] 枯草芽孢杆菌 [CMCC(B) 63501] 白色念珠菌 [CMCC(F) 98001] 黑曲霉菌 [CMCC(F) 98003] 试验用设备及材料：冰箱、恒温培养箱、高压真空灭菌锅、恒温干燥箱、刻度吸管、 90mm培养皿、大试管、小试管、试管架、天平、接种环、酒精灯、洁净工作台、培养基、灭菌生理盐水。 菌液制备：接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤中，30— 35℃培养 1824 小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中， 23— 28℃培养 2448小时，上述培养物用 %无菌氯化钠溶液制成每 1ml含菌数小于 100cfu（菌 落形成单位）的菌悬液；接种 黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上， 23— 28℃培养 57天。 加入 35ml %无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。 然后，吸出孢子悬液（用管塞有适量疏松的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用 %无菌氯化钠溶液制成每 1ml含孢子数小于 100cfu的孢子悬液。 ：取每管装量 15ml胰酪胨大豆肉汤培养基，分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草 芽孢杆菌各 2支，每支接种菌量 1ml（菌量小于 100cfu），另一支不接种，作为空白对照， 30— 35℃培养 5天。 取每管装量为 15ml的胰酪胨大豆肉汤培养基 5支，分别接种白色念珠菌、黑曲霉菌各 2支，每支接种菌量为 1ml（菌量小于 100cfu），另一支不接种，作为空白对照， 23— 28℃培养 5天。 逐日观察结果。 结果判断：空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，则该培养基的灵敏度检查符合规定。 第 7 页 共 11 页 文件名称 冻干粉针剂车间培养基模拟灌装验证方案 文件编号 JBZYZ004A 完整性测试：将挑战菌株接种在不少于 1000ml的 大豆胰蛋白胨 液体培养基中培养以制备试验菌悬液。 使用前菌悬液中挑战菌浓度不低于每毫升 106CFU。 将 100个 挑战瓶 倒置于试验菌悬液中，并应确保瓶身、瓶颈和瓶盖外表面浸没于菌悬液中。 浸没时间不应少于 4 小时。 浸侵结束后将挑战瓶取出并将外表面擦拭干净。 然后将每瓶容器来回翻转，确保容器的内表面和胶塞内表面跟培养基完全接触。 然后在阳性对照相同条件下培养至少 7 天后目视检查。 如果阳性对照生长良好而挑战瓶内无生长，表明无菌容器系统的完整性测试通过。 试验 将 刚刚 灌装的 100 支培养基，盖塞、封口。 其中 50 支放于 30～ 35℃ 下培养 14 天，同时将另外 50支放于 23～ 28℃ 下培养 14天。 14 天内各试管培养基中应无任何微生物生长。 在模拟灌装过程的前、中、后段，随机抽取 100 支， 1/2 接种小于 100CFU 的枯草杆菌芽胞，另外 1/2 接种小于 100CFU 的白色念珠菌，分别在 30～ 35℃和 23～ 28℃条件下各培养 7天， 7 天内至少有 50%的接种抗生素瓶内的培养基中有明显的接种微生物生长，并以此作为阳性对照。 、人员及设备检查 对无菌区墙壁、门、设备以及操作人员可能接触的各种表面进行无菌检验。 其取样方法、取样点、取样频率见取样计划。 在进行取样时其取样面积应保持在 25cm2。 检验结果 应符合下表规定。 ： 检查参加模拟试验的操作人。