利用基因重组技术生产制备人生长激素内容摘要：
体细胞 (宿主细胞 )中 ,使其能在细胞中复制和增殖 , 形成重组 DNA 的无性繁殖系 (即克隆 ), 从而扩增产生大量特定目的基因 , 并使之得到表达 , 即能指导蛋白质的合成。 最后从大量 菌中设法筛选出带有目的基因的重组菌 (克隆株系 ), 并进行鉴定。 然后培养克隆株系 , 提取出重组质粒 , 分离已经得到扩增的目的基因 , 再分析测定其基因顺序。 将目的基因克隆到表达载体上 , 再次导人到受体菌中 , 经反复筛选、鉴定和分析测定 , 最终获得较稳定的高产的基因工程菌 , 然后进行大量培养繁殖 , 产生出所需要的目的基因产物 , 再进行分离纯 化。 图 1 基因重组过程图 [3] 四 .利用基因工程技术生产人生长激素的工艺流程 转化混合物 基因工程细胞 扩大培养 阳性转化体 hGH 精品 hGH 粗品 培养液 分离 精制纯化 浓缩、冻干 pGH4,pXMT,pSV2neo 限制性 DNA 片段 酶切 重组 hGH 成品 克隆化分离鉴定 pSMG1和 pSMG2 转化 筛选 图 2 人生长激素制备工艺路线图 五 .用基因工程技术生产人生长激素的工艺过程 (一 )重组质粒的构建 1． 将质粒 pGH4 先用 EcoRI 进行切割，产生 2 个线性片段，然后再用 BamHI酶切，用琼脂糖凝胶电泳进行片段分离，并用标准分子质量 DNA 片段作对照，回收 的 DNA 片段，即得 hGH 目的基因 片段 同样用 EcoRI 先 酶切质粒 pXMT，得到 1 个线性片段，然后再用 BglⅡ酶切产生 2 个限制性片段，用琼脂糖凝胶电泳进行片段分离，并用标准分子质量 DNA 片段作对照，回收 的 DNA 片段，即得含金属硫蛋白（ Metallothionein MT）启动子的 DNA 片段 PSV2neo是一个载体 DNA，将其用酶切即得线性载体分子。 将上述得到的 、 3个 DNA线性片段混合，加含 ATP的 TEN缓冲液，再加入 T4DNA连接酶，混匀， ℃反应连接 18～ 24h，反应完成后于 65℃加热 10min，再置冰浴降温，得重组质粒 pSMGH 混合物。 因为 BamHI 和 BglⅡ为同尾酶，因此这两个酶进行酶切后的黏性末端能够配对连接，然后再与线性载体连接，由于金属硫蛋白（ MT）启动子基因能以不同插入方向 连接，故可得到 pSMGH1 和 pSMGH2 两种重组质粒混合物，将连。阅读剩余 0%
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