微生物培养技术

微生物培养技术内容摘要：

中的培 养基属于固体培养基。 从用途方面来看 ,该培养基属于选择培 养基。 该除草剂为含氮有机化合物 ,降解该除草剂的细菌可以 以除草剂为氮源。 故该培养基中除加入除草剂外 ,不能再含有 其他氮源 ,以选择出能降解该除草剂的细菌。 (3)在以该除草 剂为惟一氮源的培养基上 ,不能降解该除草剂的细菌 (除具有 固氮能力的细菌外 )是不能生长的。 (4)含一定量该除草剂的 培养基不透明 ,形成透明圈是该除草剂被某些细菌降解的结果。 (5)突变株 A的生长依赖于营养物质甲 ,突变株 B的生长依赖于营养物质乙。 不添加营养物质甲和乙 ,二者混合培养时都能生长 ,最可能的原因是突变株 A为突变株 B提供了营养物质乙 ,突变株 B为突变株 A提供了营养物质甲。 答案 : (1)稀释 (2)在无氮固体培养基中添加了该除草剂 (3)培养基中缺少这些细菌可利用的氮源 (4)氮气 该除草剂 (5)突变株 A缺乏合成营养物质甲所需要的酶 突变株 A生长需要营养物质甲 ,突变株 B可以提供。 突变株 B生长需要营养物质乙 ,突变株 A可以提供 【 变式训练 】 从自然界微生物中筛选某菌种的一般步骤是 :采集菌样 → 富集培养 → 纯种分离 → 性能测定。 (1)不同微生物的生存环境不同 ,获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样 ,然后再按一定的方法分离、纯化。 培养噬盐菌的菌样应从 环境中采集。 (2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件 ,使其群落中的数量大大增加 ,从而分离出所需微生物的培养方法。 对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择 的培养基 ,并在 条件下培养。 (3)接种前要对培养基进行 处理。 在整个微生物的分离和培养中 ,一定要注意在 条件下进行。 (4)如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图 ,请分析接种的具体方法。 获得图 A效果的接种方法是 ,图 B效果的接种方法是。 一同学在纯化土壤中的细菌时 ,发现培养基上的菌落连成一片 ,最可能的原因是 ,应当怎样操作才可避免此种现象 ?_________________________。 (5)如果探究温度对纤维素酶活性的影响 ,自变量是 ,应该保持 等不变 (至少答两项 )。 【 解析 】 (1)筛选菌种应从适于目的菌种生长、繁殖的环境中寻找 ,故培养噬盐菌应从高盐环境中采集。 (2)富集培养时培养基及培养条件应能促进目的菌的生长、繁殖。 (3)微生物的分离及培养中必须保证无菌 ,包括培养基的灭菌和操作过程的灭菌等。 (4)纯化培养中接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法 ,前一种方法形成的菌落分布较均匀 ,后一种方法形成的菌落分布不均匀 ,先划线的部分菌落密集甚至相连 ,后划线的部分菌落分布稀疏。 (5)探究温度对酶活性的影响时 ,温度为自变量 ,酶活性为因变量 ,其他变量如底物和酶的用量、 pH、反应时间等均为无关变量。 答案 : (1)海滩等高盐 (2)以淀粉为惟一碳源 高温 (3)高压蒸汽灭菌 无菌 (4)稀释涂布平板法 平板划线法 菌液浓度过高 增大稀释倍数 (或培养过程被杂菌污染 严格无菌操作。 或用接种环划下一区域前接种环没有灭菌 每划一个新区域前都要对接种环进行灭菌处理 )(原因与操作要对应 ) (5)温度 纤维素的量与浓度、反应时间、 pH 热点 三 微生物的计数 【 典例 3】 下面是探究如何从土壤中分离出自生固氮菌与计数的实验 ,完成下列问题 : 实验原理 :农田的表层土壤中 ,自生固氮菌的含量比较多。 将用表层土壤制成的稀泥浆 ,接种到无氮培养基上进行培养。 在这种情况下 ,只有自生固氮菌才能生长繁殖。 用这种方法 ,可以将自生固氮菌与其他细菌分离。 材料用具 :农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛有 9 mL无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛有 90 mL无菌水的锥形瓶、恒温箱。 (1)方法步骤 : ① 倒平板 :分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板 ,应在 操作。 ②制备土壤稀释液 :取土样 10g加入盛有 90mL无菌水的锥形瓶中 ,充分摇匀。 用无菌吸管吸取上清液 1mL,转至盛有 9mL的无菌水的试管中 ,依次稀释到 107稀释度。 ③涂布 :按照由 107～ 103稀释度的顺序分别吸取 mL进行平板涂布 ,每个稀释度下 ,无氮培养基应至少涂布 个平板 ,牛肉膏蛋白胨培养基涂布 个。 ④ 培养 :放入恒温箱内 ,在 28℃ ～ 30℃ 下培养 3d～ 4d。 ⑤细菌的计数 :当菌落数目稳定时 ,选取菌落数在 的平板进行计数。 如果测定的平均值为 50,则每克样品中的菌落数是。 (稀释度是 105) (2)预期结果 :相同稀释度下 ,牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数 (选填“多于”或“少于” )无氮培养基上的数目。 原因是 _____________________________________________。 【 解析 】 (1)在酒精灯火焰旁倒平板 ,可以减少杂菌的污染。 为了保证结果准确 ,一般设置 3～ 5个平板 ,选择菌落数在 30～300的平板进行计数 ,并取平均值 ,则每克样品中的菌落数为(50247。 ) 105=5 107。 (2)牛肉膏蛋白胨培养基作为对照 ,以消除无关变量对实验结果的影响 ,该培养基适合其他细菌生存 ,所以 ,它比无氮培养基上的菌落数目多。 答案 : (1)① 酒精灯火焰旁 ③ 3 1 ⑤ 30～ 300 5 107 (2)多于 无。