细菌内毒素检验方法验证方案

细菌内毒素检验方法验证方案内容摘要：

细菌内毒素检查用水 反应结果 保温时间（ —— ） 内毒素浓度 EU/ml（稀释倍 数） 序号 2λ 1 2 3 4 λ 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 阴性对照 1 2 结果计算 λ c = lg1 (∑ X/4)= 结果判断 当λ c 在 ～ 2λ（包括 2λ）时判定该批鲎试剂灵 敏度复核合格，可用于干扰实验和供试品细菌内毒素检查同时可以进入下一步验证 检验人员： 日期 复合人员： 日期 确认结果是否符合要求 是□ 否 □ 检查人： 日期： 确认人： 日期： ： 验证试验结果 一次 二次 三次 结果计算 λc = λc = λc= 结论 确认结果是否符合要求 ： 是 □ 否 □ 检查人。 日期： 确认人： 日期 ：同法操作检查三次试验记录试验结果进行对比。 目的：初步确定供试品的最大不干扰浓度或最小稀释倍数为正式干扰试验提供依据。 是检验在某一浓度下的 供试品对于鲎试剂与内毒素的反应有无干扰作用。 使用的供试品溶液应为未检验出内毒素且不超过所使用的鲎试剂的最大有效稀释倍数的溶液。 ，但最大的的稀释 倍数不得超过MVD=CL/λ(λ 为现在市面最高灵敏度，这里选公司能买到的最高灵敏度 )。 每一稀释倍数下做 2只供试品管和 2只供试品阳性对照（即用该浓度的供试品稀释液将内毒素标准品制成 2λ 浓度）。 另取 2只加入细菌内毒素检查用水做为阴性对照， 2只加 入 2λ 浓度的内毒素标准溶液作为阳性对照。 供试品阳性对照溶液的制备举例制备稀释 4倍的供试品阳性对照液方法，取 浓度为 /ml 的内毒素标准溶液 + 稀释倍数为 2的供试品稀释液 制得 含 2λEU/ml 内毒素标准液的稀释倍数为 4的供试品稀释液。 保温（ 60min）177。 2min 后观察，并记录结果。 当系列浓度中出现供试品溶液 2管为阴性，供试品阳性对照 2管为阳性时。 认为供试品在该浓度下不干扰试验，此稀释倍数即为最小不干扰 倍数，即可选择该稀释倍数进行正式干扰试验。 当系列浓度中所有浓度的供试品管都不为阴性，或供试品阳性对照管不为阳性时，说明该供试品对内毒素与鲎试剂的反应村子啊存在干扰，则应对供试品进行更大倍数的稀释（不得超过 MVD，）或者 通过其他 方式排出干扰。 为确保所选则的处理方法能不有效的排出干扰且不会是内毒素失去活性，要使用预先添加了标准内毒素在经过处理的供试品溶液进行干扰试验。 当供试品的内毒素限值单位为ＥＵ／ｍｇ或ＥＵ／Ｕ 时。 应将做小不干扰稀释倍数换算成最大不干浓度（即该稀释倍数下溶液的浓度）以ｍｇ／ｍｌ或Ｕ／ｍｌ 表示。 注射用水限值为含内 毒素量不得过。 按ＭＶＤ＝ＣＬ／ λ 计算出灵敏度为 列进行检验，用灵敏度为。 试验结果如下表： 第一次稀释倍数 原液 倍 倍 倍 观察供试品溶液 +或 观察供试品阳性对照 +或 第二次 稀释倍数 观察供试品溶液+或 观察供试品阳性对照 +或 观察供试品溶液+或 观察供试品阳性对照 +或 结论 确认结果是否符合要求 ： 是 □ 否 □ 检查人。 日期： 确认人： 日期 结论 确认结果是否符合要求 ： 是 □ 否 □ ：目的是检验某一浓度下的供试品对于鲎试剂与内毒素的反应物干扰作用。 试验重复三次。 . 操作方法： 标准对照溶液取 1支细菌内毒素标准品，用细菌内毒素检查用水稀释成 4个浓度的标准溶液即 2λ 、 λ 、 、 （方法同 ）。 ：将供试品稀释至预实验中确定的不干扰稀释倍数，再用此稀释液将 4个浓度即 2λ 、 λ 、 、 的含内毒素的供试品溶液。 这里以注射用水来进行试验 ：取规格为 ，轻弹壁使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划 痕， 75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。 每支加入 检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。 18支（管）放在试管架上，排成 5列， 4列 4支（管），1列 2支（管）。 其中的 4支 4列每列每支分别加入 的 、 、 、 的内毒素标准溶液，另一列 2支（管）加入 检查用水作为阴性对照。 将另外 18支（管）鲎试剂放在试管架上，排成 5列， 4列 4支（管）， 1列 2支（管）。 其中的 4支 4列每列每支分别加 入 的含。