注射用重组人生长激素无菌检查法验证方案(修订版

注射用重组人生长激素无菌检查法验证方案(修订版内容摘要：

长激素无菌 检查法验证方案 文件编号 VPC02101201 生效日期 有效期至 第 8 页 共 17 页 1 2 平均值 检查结果： 检验人 /时间： 复核人 /日期： 培养基灵敏度检验记录 培养基灵敏度检验记录 硫乙醇酸盐流体培养基 批号： 来源： 改良马丁培养基 批号： 来源： 培养基灭菌条件 灭菌温度： 灭菌时间： 检验日期 报告日期 试验结果 试验菌种 硫乙醇酸盐流体培 养基 (天 ) 改良马丁培养基 (天 ) 备注 名 称 管号 代数 1 2 3 1 2 3 4 5 金黄色葡萄球菌 (1) (2) 铜绿假单胞菌 (1) (2) 枯草芽孢杆菌 (1) (2) 生孢梭菌 (1) 文件名称 注射用重组人生长激素无菌 检查法验证方案 文件编号 VPC02101201 生效日期 有效期至 第 9 页 共 17 页 (2) 白色念珠菌 (1) (2) 黑曲霉菌 (1) (2) 阴性对照 改良马丁 硫乙醇酸盐 检查结果： 检验人 /时间： 复核人 /日期： 5 验证过程 菌液制备： 接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至 10mL 营养肉汤培养基中 ,置 30～ 35℃培养 18～ 24 小时，分别取上述培养物 1mL 加 ％的无菌氯化钠溶液 10 倍递增稀释至 (10 107)每 1mL 含菌数小于 100 CFU 的菌悬液。 接种生孢梭菌的新鲜培养物至 12mL 硫乙醇酸盐流体 培养基中 ,30～ 35℃培养 18～ 24小时，取上述培养物 1mL 加 9mL %无菌氯化钠溶液 10 倍递增稀释至 (107)每 1mL 含菌数小于 100 CFU 的菌悬液。 接种白色念珠菌的新鲜培养物至 10mL 改良马丁培养基中，置 23～ 28℃培养 24～ 48小时，取上述培养物 1mL 加 9mL ％的无菌氯化钠溶液 10 倍递增稀释至 (107)每 1mL 含菌数小于 100CFU 的菌悬液。 接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，经 23～ 28℃培养 5～ 7 天，取黑曲霉斜面培养物，加入 3～ %无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱， 取 析出孢子悬液 1mL加 9mL ％的无菌氯化钠溶液 10 倍递增稀释至 (107)每 1mL 含菌数小于 100CFU 的菌悬液 样品试液的制备（薄膜过滤法）：样品（ 3 批）用 250ml 的 无菌氯化钠 蛋白胨缓冲液溶解制成 250ml/30 瓶的供试液备用。 试验组 ： 在无菌室中，取一次性全封闭集菌器（三联）一套，将本品 30 瓶用 250ml 文件名称 注射用重组人生长激素无菌 检查法验证方案 文件编号 VPC02101201 生效日期 有效期至 第 10 页 共 17 页 的 无菌氯化钠 蛋白胨缓冲液溶解，按薄膜过滤法均匀滤至三管中，用 1500ml 的 无菌氯化钠 蛋白胨缓冲液均匀 冲洗三张滤膜，分 5 次冲洗，每桶每次 100ml，冲洗后夹住其中一管，在剩下两管中泵入改良马丁培养基 (100ml)后，松开管口，夹紧另两筒，泵入硫乙醇酸盐培养基（ 100ml）后，夹紧管口；另取一套一次性全封闭集菌器（三联），另取本品 30瓶用 250ml 的 无菌氯化钠 蛋白胨缓冲液溶解，按薄膜过滤法均匀滤至三管中，滤完后用 1500ml 的 无菌氯化钠 蛋白胨缓冲液均匀冲洗三张滤膜，分 5 次冲洗，每桶每次100ml，再分别向每管中泵入硫乙醇酸盐培养基（ 100ml）并夹紧管口。 将上述两套一次性全封闭集菌器 移至阳性检查室，于前两管分别中接入小于 100cfu 的白色念珠菌和黑曲霉菌，余下四管中分别接入小于 100cfu 的 金黄色葡萄球菌 、大肠埃希菌、枯草芽胞杆菌、生孢梭菌，作为试验组。 硫乙醇酸盐流体培养基集菌器置 30~35℃ 培养 35 天，改良马丁培养基集菌器置 23~28℃ 培养 35 天，逐日观察。 阳性对照组：在无菌检查室中，取一次性全封闭集菌器（三联）两套，操作同前，向两管中泵入改良马丁培养基（ 100ml），。