高三生物基因工程的基本操作程序内容摘要：
或噬菌体），从中便可分离出所需基因的 DNA片段。 建立和使用基因文库是分离高等真核生物基因的有效手段，对于基因定位和基因工程的研究都很有用。 步骤二： 基因表达载体的构建 1）用一定的 限制酶切割质粒 ，使其出现 一个切口 ，露出 黏性末端。 2）用 同一种 限制酶 切断目的基因 ，使其产生 相同 的 黏性末端。 3）将切下的目的基因片段 插入质粒 的切口处，再加入适量 DNA连接酶 ，形成了一个 重组 DNA分子 （重组质粒） 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的 基因重组的过程。 • 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 • 将目的基因导入受体细胞的原理 借鉴 细菌或病毒侵染细胞 的途径。 步骤三：目的基因导入受体细胞 ① 直接导入法有电击、显微注射、直接吸收、基因枪等方法。 （ 1）电击法：借助电击仪高压脉冲把目的基因打入宿主细胞。 （ 2）显微注射法：利用微量注射器在显微镜下直接把目的基因注入宿主细胞。 （ 3）直接吸收法：把目的基因和宿主细胞混在一起，让其吸收。 （ 4）基因枪法：在金属微粒上涂一层目的基因，然后发射到宿主细胞中。 ②间接导入法常用的载体是质粒、 λ噬菌体、科斯质粒。 （ 1）质粒是细菌染色体 DNA以外的环状双链 DNA分子，它能自我复制，也可整合到细胞染色体 DNA中与其一起表达。 质粒通常还含有标记基因，这可以从细胞的表型特征来识别。 （ 2） λ噬菌体是一种细菌病毒，其环状双链 DNA可以作为目的基因的载体。 （ 3）科斯质粒是一种杂种质粒，含有质粒和 λ噬菌体的部分顺序，很适合用作真核生物基因的载体。 大肠杆菌细胞最常用的转化方法是 : 首先用 Ca2+ 处理细胞 ,以 增大 细菌 细胞。阅读剩余 0%
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