第三节基因工程简介旧人教版

第三节基因工程简介旧人教版内容摘要：

The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1978 for the discovery of restriction enzymes and their application to problems of molecular geics 限制性内切酶的发现： (宿主细胞的限制和修饰作用 ) 限制： 细菌的自我保护系统病毒的侵染 修饰： 修饰系统－防止自杀 （ 1） 两种不同来源的入 噬菌体入 K， 入 B； （ 2） 能高频感染各自大肠杆菌宿主细胞 K株 ， B株 （ 3） 当它们分别与其它宿主菌交叉混合培养时 ， 感染下降数千倍。 （ 4） 一但 入 K 噬菌体在 B株成功 ，由 B 株繁殖出 入 K 后代 ， 能感染 B 株 , 不能感染原来 K株 . 限制性内切酶对抗外来 DNA 细菌细胞 病毒 病毒 DNA 限制性内切酶 病毒注入 DNA分子 限制性内切酶切割入侵的 DNA 切 割 修饰酶 EcoR I修饰酶 加甲基 特点 1） 识别序列： 4， 5 或 6个碱基对 EcoR I识别 5’G/AATTC 3’ 序列 3’CTTAA/G 5’ 2） 180度旋转对称回文结构 ， 对称轴在第三 ， 四碱基之间。 3）任何一个 DNA分子，每 9对碱基出现一个 II类酶切口。 限制性内切酶及其缓冲液 （ DNA ligase） DNA双链分子上相邻 3’羟基和 5’磷酸基团共价结合，形成 3’5’磷酸二酯键，使原来断开的缺口重新连接起来。 DNA片断怎么连起来。 载体的三大功能： 1） 为外源基因提供进入受体细胞的转移能力。 2） 为外源基因提供在受体细胞的的复制能力或整合力。 3）为外源基因提供在受体细胞的的扩增和表达能力。 用什么方法将目的基因送入细胞。 假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样 “分子运输车”应该具备什么特点。 理想载体具备四个条件： 1)具有对受体细胞的可转移性 ， 提 高 导 入 细 胞 的 效率。 ——对受体细胞无害 、易分离。 2)具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点 ，使外源基因在受体细胞中稳定遗传。 ——能自我复制 3)具有多种单一的限制性内切酶识别切割位点 ， 有利于外源基因的拼接插入 ——有切割位点 4)具有合适的选择标记（报告基因），便于 DNA重组分子的检测。 ——有遗传标记基因 (kb)大肠杆菌源质粒；含复制起始位点，能在大肠杆菌中高拷贝复制；含氨卞青霉素抗性基因（ Ampr）和四环素抗性基因（ Tetr）选择标记基因，对重组子进行筛选；含多个限制性内切酶酶切位点；克隆载体； 载体有两个抗药性基因 ， 插入失活一个抗药性基因 ， 而在另一个基因筛选标记存活的是转化子 ，在插入失活的基因筛选标记中不存活的是转化子。 质粒的构建与改造 1)删除不必要的 DNA区域 ， 缩小分子量 ， 提高外源DNA片段装载量。 2)灭活某些质粒的编码基因。 3)加入易于识别的选择标记基因。 4） 选择标记基因内引入内切酶的识别及。