绞股蓝50％总皂苷提取物制备工艺、指纹图谱与质量标准的研究

绞股蓝50％总皂苷提取物制备工艺、指纹图谱与质量标准的研究内容摘要：

“。 对中枢神经系统的影响 .镇静 ,催眠作用 绞股蓝能抑制小鼠的自发活动 ,可明显延长 小鼠巴比妥钠睡眠时间 ,增强阂下巴比妥钠的催眠作用”’”’“圳。 .镇痛作用 绞股蓝提取物能明显抑制醋酸所致小鼠扭体反应 , 热板法也显示总苷浸膏对小鼠有显著的镇痛作用”。 .对学习记忆有促进作用””。 对心血管系统的影响 .对心脏的作用 绞股蓝水提液对离体兔心有增加冠脉流 量的作 用 ,使心率减慢 ,并降低心脏收缩的振幅 ,降低心肌耗氧 ,对心肌缺 血有保护作用“。 ’”。 .对血管、血压的影响 绞股蓝水提物能扩张狗外周血管 ,增加 脑血流量 ,绞股蓝总苷静注对麻醉猫呈显著降压作用 ,维持时问在 分钟以上 ,且血压下降程度与剂量呈依赖关系“。 川。 对内分泌的影响 .对腺体和性活动的影响 绞股蓝提取物灌胃能显著增加未成熟 小白鼠睾丸 ,精囊、前列腺和子官的重量 ,提示有性激素样作用“’”’”。 .防治糖皮质激素的副作用 绞股蓝皂苷腹腔注射 ,能抑制地塞 米松所致的大鼠肾上腺、胸腺萎缩以及血浆皮质醇含量 减少”’”。 .对血浆促肾上腺皮质激素的影响 腹腔注射纹股蓝提 取物能明显增加正常大鼠血浆的含量”。 对消化系统的影响 .保肝作用 绞股蓝对四氯化碳肝损伤大鼠 ,有抑制受损肝组织 的脂质过氧化作用“”。 .抗溃疡作用 纹股蓝总苷对水浸造成的应激胃溃疡有明显的保 护作用 ,对幽门结扎大鼠胃溃疡亦有一定抑制作用“。 川 . 湖北中医学院届硕士毕业论文 第页绞股蓝 %总皂苷提取物制备工艺、指纹图谱与质量标准的研究 毒副作用 .土 .急性毒性 绞股蓝提取物给小鼠灌胃的 ,。 为 .177。 ./“” ,水提浸膏给小鼠腹腔注射 为 ./ ””。 绞股蓝总苷浸膏小鼠灌胃 ,。 为 ./”” .不同产地的绞股蓝 ~ 总苷和总苷Ⅱ腹腔注射 ,。 分别为 . ./和 .? ./”引。 亦有报道 ,绞股蓝总苷对小鼠腹腔注射 的 为 /,口服无毒性。 大鼠腹腔注射的。 为 . /”“。 .长期毒性 :以每日 /绞股蓝饲食给药连续 天 ,大白鼠一 般状态。 血常规、肾功能、肝功能、心电图及心 ,肝 ,肾、睾丸的病 理检查均无异常改变”“。 以每日 /剂量的绞股蓝总苷连续喂药一 个月的大鼠 ,其一般情况、体重增长 .进食量 ,血尿常规和病理组织 学检查均未发现异常””。 .特殊毒性 微核试验、 试验 和睾丸生殖细胞染色体畸变分 析实验”“ ,姊妹染色体互换试验””均表明 ,绞股蓝无致突变 作用。 第四节纹股蓝质量控制研究概况 绞股蓝鉴别 绞股蓝及其制剂的鉴别多用薄层层析法”“”’”’“’”’ ?,用硅胶、 硅胶 :,.等为吸附剂 ,以对照药材、绞股蓝总皂苷 ,人参二醇和人参 皂苷 ,对照检测 ,展开剂为氯仿一乙酸乙酯一乙醇一水 : ::.: : 正丁醇一乙酸乙酯一水 :。 氯仿一乙酸乙酯一甲醇 :。 氯 : 仿一甲醇一水 : 等。 显色剂喷以 %硫酸乙醇溶液 ,于 ℃加热 分钟显色。 喷以 %三氯化锑氯仿溶液 ,于 ℃加热 分钟 显 色。 喷以对羟基苯甲醛一硫酸溶液 ,于 ℃加热分钟 ,可以见到 与对照药材、绞股蓝总苷、人参二醇和人参皂苷。 相应的斑点 . 根据文献报导“。 “’”‘ ?绞股蓝皂苷均具有四环三萜的达玛烷型 结构 ,桔基均为低聚糖 ,其中种分别与人参皂苷。 ,:.和 :结构一致 ,其苷元有人参二醇和人参三醇等。 湖北中医学院届硕士毕业论文 第 页绞股蓝 %总皂苷提取物制备工艺、指纹图谱与质量标准的研究 参考文献的方法”“““川 ,结果色谱图大都存在杂质成分和叶绿 素干扰较大的缺点。 取不同产地的样品粉末各 ,置具塞锥形瓶中 ,加少量水使湿 润疏松 ,加 以水饱和的正丁醇 ,密塞 ,振摇 分钟 ,放置小 时 ,滤过 ,滤液加入 ~活性碳搅匀 ,置水浴上加热 分钟 ,滤 过 ,滤液蒸干 ,加水 溶解 ,用正丁醇提取次 ,每次 ,合 并正丁醇提取液 ,置水浴上蒸干 ,残渣用甲醇洛解作为供试品溶 液 .另取人参皂苷。 ,。 和。 对照品 ,加甲醇制成各含的 混合液 ,作为对照品溶液“”。 照薄层色谱法中国药典 年版一 部附录Ⅵ试验 ,吸取上述溶液各 ~ ,分别点于同一含羧 甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶薄层板上 ,以正丁醇一甲醇一氯仿一水 % :.::的下层溶液为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷以 硫酸乙醇溶液 ,于 ℃烘分钟。 供试品色谱中虽然斑点分离较理 想 ,但各地样品的斑点数及 ,值或颜色都不尽相同”“”。 另根据文献”” ,由于绞股蓝皂苷分离提纯较为困难 ,多数文献在 进行薄层色谱鉴别时 ,均以日本文献报道为依据”” ,以人参皂苷。 或以绞股蓝皂苷作为对照品 ,展开剂多是常用的人参皂苷展开剂 ,一 般所得 ?个斑点 ,与有些人参总皂苷样品的色谱很相似 ,实际上反 映不出绞股蓝的特点“”。 取不同产地的绞股蓝样品适量 ,粉碎成粗粉 , 分别取 ,置 带塞锥形瓶中 ,加甲醇 ,超声提取分钟 , 滤过 ,滤液蒸干 ,残渣用水溶解 ,加入已装好的氧化铝 日 一大孔吸附树脂。 一。 :柱 ,用乙醇 ,水预冼 , . 再依次用水 %乙醇 Ⅲ洗脱 ,弃去洗脱液 ,继用 %乙醇 洗脱 ,收集洗脱液 ,蒸干 ,分别用甲醇溶解 ,作为供试品溶 液“”。 吸取上述不同产地的供试品溶液及人参皂苷 ,、 .对照 品溶液 /各 ,分别点样于同一含有羧甲基纤维素钠为粘 :: : 合剂的硅胶薄层板上 ,以氯仿一醋酸乙酯一甲醇一水 , ℃以下放置的下层为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干。 喷以 %硫酸 乙醇溶液 ,于 ℃烘约 分钟 ,于日光下观察色谱或在紫外光下观 湖北中医学院届硕士毕业论文 第页绞股蓝 %总皂苷提取物制备工艺 、指纹图谱与质量标准的研究 察其荧光色谱。 结果从色谱中可见到个不同产地的绞股蓝样品 ,除 在 ,值为 . 处有一具棕褐色浅兰色荧光的斑点相一致外 ,其 它样品的斑点均不一致 ,且与人参皂苷 ,、。 ,。 对照品也无对应 :: :: 的斑点。 在展开剂方面曾以氯仿一甲醇一水 、 : : : 及氯仿一醋酸乙酯一甲醇一水 、正丁醇一甲醇一氯仿一水 : .::等不同的展开系统展开 ,结果也得不到理想的共同色谱。 另外在吸附剂方面使用硅胶及硅胶。 ,硅胶板展出 的斑点分离效果较差 ,且有拖尾现象 ,用硅胶板展出后喷 硫酸乙醇溶液烘烤易变焦 ,故 应注意掌握烘烤条件。 在提取方面 ,曾采用甲醇回流提取法提取 ,在甲醇提取前先用乙 醚回流提取以除去叶绿素及部分亲脂性成分 ,甲醇提取物再用活性炭 脱色一次 ,回收甲醇后用正丁醇提取。 蒸干正丁醇后用甲醇溶解作供 试品溶液进行薄层层析 ,结果斑点清晰、无拖尾、杂质干扰少 ,但此 法对不同产地的绞股蓝重现性不好”” . 文献报导“’。 ?绞股蓝皂苷经酸水解后有与人参二醇和人参三 醇 ,值和颜色相同的斑点。 其他斑点也有较好的重现性。 有人曾做 了实验 ,结果在纹股蓝皂苷元的薄层色谱中在与人参二醇、人参三醇 对照品相对应的位置上无相同颜 色的斑点 ,改换多种展开系统屡试结 果均如此。 另外在实验过程中曾分别对比考察过不同产地的纹股蓝茎叶的 薄层层析 ,结果薄层色谱基本一致 ,提示绞股蓝的茎叶均有绞股蓝皂 苷。 绞股蓝的含量测定 . 皂苷类成分的测定 由于绞股蓝含有皂苷成分种类颇多 ,因而合理而精确地测定其皂 苷的含量不容易 .目前 ,使用高效液相色谱法测定绞股蓝中单一的化 学成分的含量未见报道 .绞股蓝的含量测定方法主要有 : ..重量法 采用水提液脱脂后 ,用正丁醇萃取 ,莘取物蒸干后 称重 ,计算含量。 另一种是样品经树脂柱分离后称重 ,计算含量。 湖北中医学院 届硕士毕业论丈 第页绞股蓝 %总皂苷提取物制备工艺、指纹图谱与质量标准的研究 ..大孔吸附树脂一比色法 样品乙醚脱脂后 ,用甲醇回流提取 ,回收甲醇 ,残渣加 %氢氧 化钠溶液溶解 ,加入到已处理好的大孔吸附树脂柱上 ,用 %氢氧化 钠溶液和水液冲洗后再用 %乙醇洗脱 ,收集乙醇洗脱液 ,蒸干 ,残 渣加甲醇稀释至刻度 ,加入 %香草醛冰醋酸溶液和高氯酸 ,予℃ 测定吸收 水浴中加热 分钟后 ,冰水浴冷却 ,加入冰醋酸于 度”“ . 样品以甲醇回流提取 ,残渣加水溶解后通过预先处理好的大孔吸 附树脂柱 ,以甲醇洗脱 ,洗脱液上氧化铝柱 ,以 %甲 醇溶液洗脱 , 洗脱浓缩至干 ,残留物加甲醇溶解并定量 ,加香草醛冰醋酸溶液和高 氯酸 ,置 ℃水浴中加热 分钟 ,冷后加冰醋酸 ,用分光光度法在波长处测定吸收度 ,并以人参皂甙。 为对照品计算总皂甙含 量 ?. .. 比色法”“ ? %乙醇溶解 ,滤液蒸 样品以水为溶剂提取 ,浓缩至浸膏状 ,用 发至无醇味 ,再用水溶解 ,水溶液用乙醚脱脂后 ,用水饱和的正丁醇 萃取 ,萃取液减压浓缩至干 ,残渣用正丁醇溶解 ,移入容量瓶中 ,用 甲醇稀释至刻度 .加 %香草醛冰醋酸溶液新配和高氯酸 , 恒温 分钟 ,取出 ,用水冷却至室温 ,加冰醋酸 ,摇匀 ,用分光光 度 法在波长 测定吸收度。 以人参皂苷 ,或者纹股蓝总苷 ,人 参皂苷、人参皂苷、人参二醇对照品计算含量。 此法还用于绞股 蓝及其其制剂中总皂苷的含量测定。 ..柱层析一比色法“” 样品以甲醇回流提取 ,回收甲醇 ,残。