新编全国钩端螺旋体病监测方案(final

新编全国钩端螺旋体病监测方案(final内容摘要：

暗视野显微镜检查，每 400 倍暗视野下不少于 50 条，运动活泼并无自凝者可作显凝抗原。 2．操作方法 血清 56℃ 水浴灭活 30 分后，用生理盐水稀释，健康人以 1∶ 早期病人以 1∶ 50、恢复期病人以 1∶ 100 开始，做倍比稀释。 取 15 个代表株的培养液依次加入倍比的稀释血清孔。 摇匀后 37℃ 孵育 ～ 2h。 用接种环挑取反应液及对照，放置载物玻片上暗视野显微镜下观察凝集情况，测定其凝集滴度。 凝集滴度按原血清稀释倍数 2 计算。 3．终点凝集滴度的判定 以出现＋＋凝集 (即视野中 50%钩体凝集 )的血清最高稀释度作为终点凝集滴度。 161 附件 2 间接酶联免疫吸附试验 (间接 ELISA) 1．操作步骤： 血清用 PBS稀释液按 1:400、 1:800、 1:1600、 1:3200稀释。 取包被钩体抗原的酶标板，将稀释好的阳性血清、阴性血清及样本血清分别加入酶标板孔中，每孔 100μl，同时加入 2孔空白对照 (PBS)。 37℃ 60分钟，弃去孔中液体。 洗板，于酶标板每孔加入洗涤液 250μl，洗板 3次。 每支酶标羊抗人 IgG用 三蒸水充分溶解均匀后，再用 PBS按 1:50 稀释，每孔加稀释好的酶结合物 100μl。 放置 37℃ 40分钟。 洗板：洗板 4次 (方法同 )。 显色与终止：加底物液 A、底物液 B各 1滴。 室温避光显色， 10分钟后，每孔加终止液 1滴，终止反应。 采用波长 405nm的酶标仪测定 OD值，阴性 OD值 判定界值。 检测样本的 OD值 ≥此判定界值则为阳性。 2．试剂配制： 2． 1 洗涤液 (PBST， )： NaCl KH2PO4 KCl Tween 20 硫柳汞 D2H2O至 1000ml 2． 2 稀释液 (PBS， ): NaCl KH2PO4 KCl 硫柳汞 D2H2O至 1000ml 162 2． 3 底物液 A( ， %过氧化氢脲，pH ) 柠檬酸 .H2O 过氧化氢脲 D2H2O至 1000ml 250ml 2． 4底物液 B( 3`、 5`─四甲基联苯胺， TMB，作用时终浓度 ) 2． 4． 1 TMB贮存液 TMB贮存液 (50mg/ml) TMB 150mg 二甲基亚砜 3ml 注意事项： TMB 不易 溶解，缓慢加入二甲基亚砜中并不断摇晃或搅拌，水浴适当加热可加速溶解。 2． 4． 2 底物液 B 柠檬酸 .H2O EDTANa2 (EDTA) D2H2O至 1000ml 250ml TMB贮存液 (50mg/ml) 4ml 1ml 2． 5 终止液： 2M H2SO4 163 附件 3 分离培养钩体方法 1 培养基制备方法 Korthof培养基成分和制备方法 成分 蛋白胨 (可用胰蛋白胨代替 ) 400mg 氯化钠 (NaCl) 700mg 氯化钾 (KCl) 20mg 碳酸氢钠 (NaHCO3) 10mg 磷酸二氢钾 (KH2PO4) 120mg 碳酸氢二钠 (12个结晶水 )(N2HCO3 .12H2O) 440mg 氯化钙 (CaCl2) 20mg(如高压 灭菌或煮沸后出现沉淀，可省去此成分 ) 蒸馏水 500ml 制法 20min过滤，校正 pH为 ，分装于烧瓶内，每瓶 100ml， 15磅 30min高压灭菌。 兔血清 56℃ 30min灭活。 将 8～ 10%。 Tepck ии培养基 (磷酸盐缓冲溶液 )成分和制备方法 母液 1/15mol/L 12g/500ml 蒸馏水 磷酸缓冲液 1/15mol/L KH2PO4 取 1/15mol/L 80ml、 1/15mol/L KH2PO4 20ml，混匀，调整～ ,加入蒸馏水 900ml 混匀，分装试管，并用 15 磅 30min高压灭菌，再以无菌操作加入灭活兔血清最后浓度为 8～ 10%。 2 培养分离病原体 病人血液培养： 采集早期病人血液，无菌操作接种于 2～ 3管 Korthof培养管中，每管接种 1～3滴。 血培养管置 28℃ 培养。 每隔 5～ 7d取培养物暗视野显微镜下观察有无钩端螺旋体生长，若有生长，即 为分离阳性。 若未见生长，需继续培养 60d，仍不见钩端螺旋体方作阴性处理。 ： 164 接取病后两周以上的病人中段尿 30～ 50ml于无菌离心管中 3500～ 4000r/min离心 1h。 取沉渣 ～ 接种于 2～ 4 管上述培养基中， 28℃ 孵育。 每隔 5～7d取材镜检。 为提高检出率和减少污染，可在采集尿标本的前一天晚上给病人服碳酸氢钠 (NaHCO3)2～ 4g，同时，在培养基中加入 100～ 400μg/ml 5氟脲嘧啶或1/2020的磺胺嘧啶。 动物肾脏培养： 无菌操作，采集新鲜动物肾脏 (包膜 完整 )，剪取米粒大小接种于 2～ 3 管Korthof 培养管中。 置 28℃ 培养。 每隔 5～ 7d 取培养物暗视野显微镜下观察有无钩端螺旋体生长，若有生长，即为分离阳性。 若未见生长，需继续培养 60d，仍不见钩端螺旋体方作阴性处理。 3． 菌株分群、分型： 应用分群血清与新分离的钩端螺旋体作凝集试验，确定菌群。 应用交叉凝集素吸收试验或分型因子血清来确定菌型。 范文最新推荐 165 高校毕业生工作总结 [高校毕业生工作总结 ]作为一名即将面临毕业的大四学生，我将我的个人情况作如下总结： （一）政治思想 在马列主义、毛泽东思想、邓小平理 论以及 jzm 同志。 三个代表。 的正确指引下，我逐渐成长为一名有理想、有道德、有文化、有纪律，面向现代化、面向世界、面向未来的当代大学生，高校毕业生工作总结。 作为合格的大学生，我坚决拥护中国共产党领导的多党合作和政治协商制度；坚决拥护社会主义；同时，始终坚持以辩证唯物主义方法分析和处理问题。 我在学习科技文化知识的同时，也在不断努力提高自身的思想道德素质，以适应未来社会的需要。 （二）道德品质 我始终以爱国守法、明礼诚信、团结友善、勤俭自强、敬业奉献作为衡量道德的标准来要求自己。 在社会生活中，我努力做到文明礼 貌、助人为乐、爱护公物、保护环境、遵纪守法；在家庭生活中，也坚持孝敬父母、勤俭节约、团结邻里。 在走上工作岗位后，我也将以爱岗敬业、诚实守信、办事公道、服务群众、奉献社会来要求自己。 （三）学习工作成绩 四年来，在师友的严格教益及个人的努力下，我具备了扎实的专业基础知识，系统地掌握了学、学、学和 x 学四大主干课程及其它相关理论知识；熟悉涉外工作常用礼仪；能熟练操作范文最新推荐 166 计算机办公软件。 同时，我利用课余时间广泛地涉猎了大量书籍，不但充实了自己，也培养了自己多方面的技能。 此外，我还积极地参加各种社会实践活动，抓住每 一个机会锻炼自己。 （四）作风纪律 大学四年，我深深地感受到，与优秀学生共事，使我在竞争中获益；向实际困难挑战，让我在挫折中成长。 祖辈们教我勤奋、尽责、善良、正直；大学培养了我实事求是、开拓进取的作风。 在实践中，我形成了团结服从、顾全大局的行为准则。 同时 ,中华民族的优秀传统造就了我诚实善良、遵纪守法的品质。 严谨的作风和严明的纪律成为我成功走向社会、走上工作岗位的有力保障，工作总结《高校毕业生工作总结》。 （五）主要不足 作为一名尚未正式步入社会的学生，我深知自己存在诸多不足。 目前，我最大的劣势就是缺 乏长期从事某种稳定工作的经验，也正因为如此，有时我会对自己缺乏信心，在处理问题时，往往过于谨慎、保守，不敢轻易、大胆地尝试新方法。 但我同时也相信，这种现象会随着我走上工作岗位逐渐得到改善。 另外，可以肯定的是，我自身一定还存在着其他我尚未意识到的不足。 我真诚地希望，在今后的工作中，领导和同事们能够帮助我，及时指出我暴露出来的缺陷，我一定虚心接受，及时改正；同时，我会在工作中不断充实和改造自己，努力进取、钻研业务，早日成为国家的栋梁之才。 范文最新推荐 167 本人被派往三明市大田县屏山乡党政综合办公室参加。 三支一扶。 工作一年 来，秉持。 到农村去，到基层去，到人民最需要的地方去。 的理念，广泛深入群众，主动向领导学习，向干部同事学习，向广大人民群众学习，勤奋工作，刻苦锻炼，认真做到。 五个为。 ：一是有为。 做到工作有目标、有规划，按计划朝目标序时推进，杜绝盲目行事、虚度光阴的不良行为，手脚麻利、快事快为，当天的任务当天完成，不拖拉懒散，努力实现事有所为、为有所果。 二是实为。 就是做事情脚踏实地、实事求是，养成不耻下问的良好习惯，拒绝盲从和凭直觉做事，做到公平公正、不偏不倚，树立为人民服务的公仆意识，深入基层、接近群众，努力为人民群众办事。 三是能为。 就是不断加强学习，主动向领导学习、向同事学习、向广大人民群众学习，逐步积累基层工作经验，将所学到的知识与实践紧密结合起来，努力克服作风漂浮、高傲自大、心浮气躁的消极意识形态。 四是敢为。 敢为不是乱为，而是事事做到比领导快半拍，领导的决策意图是什么，大概什么时候会出台新计划，都具备超前意识并做好适当准备，这样才没有手足无措，真正做到了超前不抢前。 五是新为。 就是不断解放思想、大胆创新，着力培养创新思维和改革意识，敢于向领导提出自己的建议和看法，大胆建言献策但不决策，遇事广思维、多角度分析，挖掘亮点、抓住特色。 一年来，在各级党委政府、各级。 三支一扶。 办、各级领导、干部同事、广大人民群众的大力关心和支持下，通过自己的不懈努力和辛勤工作，取得了一定成绩： 一、强化自身思想作风建设 范文最新推荐 168 在改造客观世界的同时，更加注重改变自己的主观世界，工作以来，一直保持读书、看报，关注科技发展动态的习惯，认真学习。 三个代表。 重要思想和。 十七大。 精神，牢固树立和落实科学发展观，并把学习和实际工作结合起来，联系群众，为民办实事，时刻把群众疾苦挂在心上，牢记服务宗旨加深群众感情，端正对群众的态度，积极投身到为人民服务的实践中去 ，一切为农民着想，为农民造福。 二、切实增强为民服务本领 利用业余时间深入群众开展扶贫工作。 实现科技致富，人的素质是关键，当前人民群众盼的是致富，要的是服务，求的是技术，希望我们能指出致富门路，人的素质显得更为重要。 为此，我努力把学习放在十分突出的位臵，深入村、组指导生产，增加社。