食用菌菌种保藏技术

食用菌菌种保藏技术内容摘要：

1、种是主要的生物资源，也是食用菌生产首要的生产资料。 一个优良的菌种被选育出来以后，必须保持其优良性状不变或尽可能地少变慢变，才不至于降低生产性能，能长期在生产中使用。 因此，菌种保藏在食用菌生产上具有重要的意义。 一、菌种保藏原理菌种保藏的方法很多，但原理大同小异。 首先要挑选优良纯种。 利用微生物的孢子、芽孢及营养体；其次，根据其生理、生化性，人为创造低温、干燥或缺氧等条件，抑制微生物的代谢作用，使其生命活动降低到极低的程度或处于休眠状态，从而延长菌种生命以及使菌种保持原有的性状，防止变异。 不管采用哪种保藏方法，在菌种保存过程中要求不死亡、不污染杂菌和不退化。 二、菌种保藏的方法1、低温定期移植保藏法。 2、将需要保藏的菌种接种在适宜的斜面培养基上，适温培养，当菌丝健壮地长满斜面时取出，放在 3温干燥处或 4冰箱、冰柜中保藏，每隔 4月时间移植转管一次，具体应根据菌种特性决定。 保藏时要注意环境温度不能太高，以防霉菌通过棉塞进入管内。 因此，若用棉塞，可用干净的硫酸纸或牛皮纸包扎棉塞，即可减少污染的机会，也可防止培养基干燥。 除草菇菌种外，其他食用菌菌种都能采用此法保藏。 2、液体石蜡保藏法。 取化学纯液体石蜡（要求不含水分、不霉变）装于三角瓶中加棉塞并包纸，在 1 公斤/平方厘米压力下灭菌 1 小时，再放入 40恒温箱中数天，以蒸发其中水分，至石蜡油完全透明为止。 将处理好的石蜡油移接在空白斜面上，28培养 3、 2，证明无杂菌生长方可使用。 然后用无菌操作的方法把液体石蜡注入待保藏的斜面试管中。 注入量以高出培养基斜面 米，塞上橡皮塞，用固体石蜡封口，直立于低温干燥处保藏。 保藏时间在一年以上，在低温下，保藏时间还可延长。 3、沙土管保藏法。 取河沙用水浸泡洗涤数次，过 60 目筛除去粗粒，再用 10%盐酸浸泡 2时，除去其中有机物质，再用水冲洗至流水的 到中性，烘干备用。 同时取贫脊土或菜园土用水浸泡，使呈中性，沉淀后弃去上清液，烘干碾细，用 100 目筛子过筛，将处理好的沙与土以（21 混匀，用磁铁吸出其中的铁质，然后分装小试管或安瓿内，每管装量 ，塞棉塞，用纸包扎灭菌（斤/平方厘米，1 小时），再干热灭菌 4、（160，2时）1，进行无菌检验，合格后使用。 将已形成孢子的斜面菌种，在无菌条件下注入无菌水 3升，刮菌苔，制成菌悬液，再用无菌吸管吸取菌液滴入砂土管中，以浸透砂土为止。 将接种后的沙土管放入盛有干燥剂的真空干燥器内，接上真空泵抽气数小时，至沙土干燥为止。 真空干燥操作需在孢子接入后 48 小时内完成，以免孢子发芽。 制备好的沙土管用石蜡封口，在低温下可保藏 2、滤纸片保藏法。 取白色（收集深色孢子）或黑色（收集白色孢子）滤纸，剪成 4米的小纸条，平铺在培养皿中用纸包裹进行灭菌（1 公斤/平方厘米，30 分钟）。 采用钩悬法收集孢子，让孢子落在滤纸条上。 将载有孢子的滤纸条放入保藏试管中，再将保藏试管放入 5、干燥器中 1，除去滤纸水分，使滤纸水分含量达 2%左右，然后低温保藏。 5、粒保藏法：取无瘪粒、无杂质的小麦淘洗干净，浸泡 12时，加水煮沸 15 分钟，继续热浸 15 分钟，使麦粒胀而不破，沥干水分摊开晾晒，使麦粒的含水量在 25%左右。 将碳酸钙、石膏拌入熟麦粒中（麦粒、碳酸钙、石膏比例为 10 公斤:133 克:33 克），拌和均匀后装入试管中，每管约 2，然后清洗试管，塞棉塞，灭菌 斤/平方厘米，2 小时），经无菌检查合格后备用，试管基质冷却后接种，适温培养，待菌丝长满基质后用石蜡涂封棉塞，放低温保藏。 2 年左右转接一次。 麸曲保藏法。 取新鲜麸皮，过 60 目筛除去粗粒。 将麸皮和自来水按 1 6、:1 拌匀，装入小试管，每管约装 1/3 高度，加棉塞用纸包扎，高压灭菌（斤/平方厘米，30 分钟），经无菌检查合格后备用，将生长在斜面培养基上的健壮菌种，移种至无菌麸曲管中，移种时注意尽管捣匀小试管中的麸皮，呈疏松状态，在适温下培养至菌丝长满麸皮为止，将麸曲小管置干燥器中，在低温或适温下保藏。 6、生理盐水保藏法。 取纯氯化钠 ，放入 100%毫升蒸馏水中，搅拌均匀分装试管，每管 5升，进行灭菌（1 公斤/平方厘米，30 分钟），经无菌检查合格后备用，将待保藏的菌种接入马铃薯葡萄糖液体培养基中适温振荡培养 5。 无菌操作吸取少许培养菌种注入经检验合格的生理盐水试管中，塞上无菌橡皮塞，用石蜡涂封，在 7、室温或低温保藏。 7、冷冻真空干燥法。 将已培养、生长丰富的菌体或孢子悬浮于灭菌的血清、卵白、脱脂奶制成菌悬液，将悬液以无菌操作分装于灭菌的玻璃安瓿瓶中，每管约 升，然后用耐压橡皮管与冷冻干燥装置连接，安瓿瓶放在冷冻槽中于速冷冻，并在冷冻状态下抽空干燥，并在真空状态下熔封安瓿，在存，一般可保存十年以上，但成本较高。 8、液氮超低温保藏法。 首先将要保藏的菌种制成菌悬液备用；其次，准备安瓿瓶，每瓶加入 升冷冻保护剂 10%（体积比）甘油蒸馏水溶液，塞棉塞灭菌（1 公斤/平方厘米，5 分钟）。 无菌检查后，接入要保藏的菌种，火焰熔封瓶口，检查是否漏气，将封好口的安瓿瓶放在冻结器内，以每分钟下降 1的速度缓慢降温，使保藏品逐步均匀地冻结，直至以后冻结速度就不需控制，安瓿冻结后立即放入液氮罐内，在藏，该法只有少数科研院所使用。 专利查询。