20xx人教版高中生物选修一5-3血红蛋白的提取和分离ppt同步课件

20xx人教版高中生物选修一5-3血红蛋白的提取和分离ppt同步课件内容摘要：

(2)凝胶色谱柱的装填。 (3)样品的。 磷酸缓冲液 色谱柱 加入和洗脱 4． 操作提示 (1)红 细胞的洗涤 、 与 十分重要。 洗涤次数过少 ，无法除去 ；离心速度 和时间 会使 等一同沉淀 ， 达不到分离效果。 (2)色谱柱填料的处理 商品凝胶使用前需直接放在 中膨胀 ， 可以将加入其中的湿凝胶 ， 加速膨胀。 洗涤次数 离心速度 离心时间 血浆蛋白 过高 过长 白细胞 洗脱液 用沸水浴加热 (3)凝胶色谱柱的装填 在装填凝胶柱时 ， 不得有 存在。 因其能搅乱洗脱液中蛋白质的 ， 降低分离效果。 (4)蛋白质的分离 如果 ， 说明色谱柱制作成功。 气泡 洗脱次序 红色区带均匀一致地移动 [思维激活 2] 透 析的目的是什么。 依据了什么原理。 提示 透析的目的在于去除血红蛋白溶液中相对分子质量较小的蛋白质 ， 透析依据的原理是半透膜只允许小分子透过 ， 不允许大分子透过。 1． 样品的处理 (1)红 细胞的洗涤 ① 目的：去除杂蛋白。 ② 方法 a． 采集血样 → → → → e.低速离心 → 重复 d、 e步骤三次。 (2)血红蛋白的释放 红细胞在蒸馏水和甲苯的作用下破裂 ， 释放出血红蛋白。 (3)分离血红蛋白溶液 ① 将混合液进行离心后 ， 会明显看到试管中的溶液的分层情况 (从上往下 )：第 1层：无色透明的甲苯层；第 2层：脂溶性物质的沉淀层 ——白色薄层固体；第 3层：血红蛋白的水溶液 ——红色透明液体；第 4层：其他杂质的暗红色沉淀物。 ② 将液体用滤纸过滤 ， 除去脂溶性沉淀层 ， 于分液漏斗中静置片刻后 ， 分出下层的红色透明液体。 ③ 目的：经过离心使血红蛋白和其他杂质分离开来 ， 便于下一步对血红蛋白的纯化。 (4)透析 ① 原理：透析袋能使小分子自由进出 ， 而将大分子保留在袋内。 ② 过程：取 1 mL的血红蛋白溶液装入透析袋中 ， 将透析袋放入盛有 300 mL的物质的量浓度为 20 mmol/L的磷酸缓冲液中 (pH为 )，透析 12 h。 ③ 目的： ； b． 用于更换样品的缓冲液。 2．凝胶色谱操作 3． 纯度鉴定 ——SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 判 断纯化的蛋白质是否达到要求 ， 需要进行蛋白质纯度的鉴定。 鉴定的方法中 ， 使用最多的是 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳。 4． 结果分析与评价 项 目 分 析 血液样品 的处理 ① 分层明显 → 样品处理完成 ② 分层不明显的原因 洗涤次数少，未能除去血浆蛋白离心速度过高或时间过长 凝胶色谱 柱的装填 ① 放一支与凝胶柱垂直的日光灯 → 直接检查凝胶是否装填得均匀 ② 加入大分子有色物质如蓝色葡聚糖－ 2 000 或红色葡聚糖，若色带均匀、狭窄、平整 → 装填成功。