高中生物专题5课题2多聚酶链式反应扩增dna片段课件新人教版选修1内容摘要:
保留复制原理 , 合成一条新的与模板 DNA链互补的半保留复制链。 重复循环变性 — 复性 — 延伸三过程 , 就可获得更多的 “ 半保留复制链 ” , 而且这种新链又成为下次循环的模板。 每完成一个循环需 2~4 min, 2~ 3 h就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。 PCR扩增过程中的易错点 ① PCR过程中无解旋酶 , 破坏氢键需要升高温度才能打开氢键 , 但此时的温度还不能破坏磷酸二酯键 , 因此 , 热变性后是 DNA单链 , 并未分解成单体。 ② 复性时只是在引物和 DNA单链之间形成氢键 , 两条单链之间并未形成氢键 , 因此复性后 , 无双链 DNA分子形成。 三、 PCR的实验操作 1. 操作步骤 (1)按 PCR反应体系的配方配制所需试剂。 (2)用微量移液器按照配方在微量离心管中依次加入各组分。 (3)盖严离心管口的盖子 , 用手指轻轻弹击管壁。 (4)将微量离心管放在离心机上 , 离心约 10 s。 (5)将离心管放在 PCR仪上 , 设置好 PCR仪的循环程序。 以上过程可以概括为准备 、 移液 、 混合 、 离心 、 反应五大步。 2. 实验结果与分析 (1)实验中 DNA含量的测定。 ① 稀释:取 2 μL PCR反应液 , 加入 98 μL蒸馏水 , 即将样品稀释了 50。高中生物专题5课题2多聚酶链式反应扩增dna片段课件新人教版选修1
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