沪科版生命科学高二上6-3基因工程与转基因生物5内容摘要:
骤 基因定位 (确定目的基因在 DNA上的位子) 用限制酶从 DNA分子中切取 mRNA DNA 方法 逆转录酶 ◆ 目的基因与运载体重组 ◆ 筛选含目的基因的受体细胞 用与切取目的基因相同的限制酶将质粒切开,然后在DNA连接酶的作用下,使目的基因与质粒组合,形成重组质粒。 (重组 DNA) ◆ 重组 DNA分子导入受体细胞 ● 质粒 DNA分子上通常有特殊的遗传标记基因,所以重组质粒也具有遗传标记基因(如抗生素抗性基因,也可以在质粒上人工重组抗性基因)。 ●受体细胞获得重组质粒的同时也获得了抗性基因,所以受体细胞能在含有抗生素的培养基中生长,未成功导入重组质粒的受体细胞无法在含有抗生素的培养基中生长而死亡。 练习 质粒是基因工程中最常用的运载体,它存在于许多细菌体内。 质粒上有标记基因如图所示,通过标记基因可以推知外源基因(目的基因)是否转移成功。 外源基因插入的位置不同,细菌在培养基上的生长情况也不同,下表是外源基因插入位置(插入点有 a、 b、 c),请根据表中提供细菌的生长情况,推测①②③三种重组后细菌的外源基因插入点,正确的一组是 _____ 细菌在含青霉素 培养基上生长情况 细菌在含四环素 培养基上生长情况 ① 能生长 能生长 ② 能生长 不能生长 ③ 不能生长 能生长 A.①是 c;②是 b;③是 a B.①是 a和 b;②是 a;③是。沪科版生命科学高二上6-3基因工程与转基因生物5
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制酶切割质粒使之出现一个切口,将目的基因插入切口处,让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后,在连拉酶的作用下连接形成重组 DNA分子。 重组 DNA分子导入受体细胞 导入 扩增 要让目的基因表达,必须将它导入受体细胞并进行扩增。 为获得目的基因的表达产物时,通常以大肠杆菌等无害易得的细菌为受体。 为改进某种生物时,将欲改进的生物细胞为受体。 为使重组的 DNA分子更容易进入受体细胞
帝王蝶幼虫捕食, 4天后有 44%的幼虫死亡 转基因生物产品的安全性 “转雪花莲凝集素基因的马铃薯能够对大鼠的免疫系统造成损害” —1998年 Pusztai事件 Pusztai博士 Killer Bt玉米 马利筋 帝王蝶幼虫死亡 44%(室内) 帝王蝶事件 转基因油 学生调查资料: 日清色拉油一级大豆油 新西兰猕猴桃 (4030) 姬娜苹果 (4133 4173) 红蛇果 (4016
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整的 DNA分子。 分子运输车 —— 运载体 将外源基因送入细胞一般利用质粒作为运载体。 质粒进入细胞后,停留在细胞中进行自主复制,或接合到染色体上,随染色体 DNA进行同步复制 二、基因操作的基本步骤 供体生物细胞 取出 DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 两种方法: ⑴从某种生物体细胞中分离 DNA合成仪 ⑵ 通过化学方法人工合成 逆转录或直接合成的方法将脱氧核苷酸合成 DNA(基因)
A连接酶的作用下,使目的基因与质粒组合,形成重组质粒。 (重组 DNA) ◆ DNA分子导入受体细胞 ● 质粒 DNA分子上通常有特殊的遗传标记基因,所以重组质粒也具有遗传标记基因(如抗生素抗性基因,也可以在质粒上人工重组抗性基因)。 ●受体细胞获得重组质粒的同时也获得了抗性基因,所以受体细胞能在含有抗生素的培养基中生长,未成功导入重组质粒的受体细胞无法在含有抗生素的培养基中生长而死亡。 三
片段在短时间内成百万倍地扩增。 • 步骤二:目的基因与运载体重组 1)用一定的 限制酶切割质粒 ,使其出现一个切口 ,露出 黏性末端。 2)用 同一种 限制酶 切断目的基因 ,使其产生 相同 的 黏性末端。 3)将切下的目的基因片段 插入质粒 的切口处,再加入适量 DNA连接酶 ,形成了一个 重组 DNA分子 (重组质粒) 目的基因与运载体的结合过程,实际上是不同来源的 基因重组的过程。