革兰氏染色法的步骤

革兰氏染色法的步骤内容摘要：

革兰氏染色法的步骤 详细阐叙革兰氏染色法的步骤 浏览次数：174 次悬赏分：0 | 解决时间：20117:44 | 提问者： 肖箫 2011佳答案 革兰氏染色一、 目的：在细胞发放之前，利用标准的革兰氏染色法对即将发放的细胞悬液进行检测，判断细胞悬液中是否含有革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。 二、 原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。 三、实验用品准备：灭菌玻片、10液器、10菌移液吸头、100液器、100液吸头、接种环、酒精灯、打火机、革兰氏染色液、吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸、计时器四、 操作：1 涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液枪吸取 10检样品滴在载玻片的中央，用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。 2 干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。 3 固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过 2，共约 2种，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过 60），放置待冷后，进行染色。 4 初染：在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫 1，使染色液覆盖涂片，染色约1 水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 6 媒染：用 100液枪吸取约 300液滴在涂片薄膜上，使染色液覆盖涂片，染色约 1 水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 8 脱色：斜置载玻片，滴加 95%乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色为止，大约需时 20即水洗。 9 复染：在涂片薄膜上滴加沙黄染液 1，使染色液覆盖涂片，染色约10 水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 11 干燥、观察：用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物后滴一滴浸油在玻片上，用油镜观察细菌的形态及颜色，紫色的是革兰氏阳性菌，红色的是革兰氏阴性菌。