20xx沪科版高中生命科学第二册63基因工程与转基因生物4

20xx沪科版高中生命科学第二册63基因工程与转基因生物4内容摘要：

____ PCR技术扩增 化学方法人工合成 从基因文库获取的方法 方法 基因文库的构建 PCR技术扩增 人工合成 基因组文库 部分基因文库 （如 cDNA文库） 优点 操作简单 专一性 可在短时间内大量扩增目的基因 专一性强，可产生自然界中不存在的新基因 缺点 工作量大、盲目性大、专一性差 操作过程较麻烦、技术要求过高 需要严格控制温度，技术要求高 适用范围小 提取目的基因的方法与比较 二：基因表达载体的构建 —基因工程的核心 1 目的： 使目的基因在受体细胞中 稳定存在 ，并且可以 遗传给下一代 ，同时使目的基因能够 表达和发挥 作用。 2 组成： 目的基因 +启动子 +终止子 +标记基因 等 ： 它们有什么作用。 a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 位于基因的首端 ,是mRNA结合位点 位于基因的末端 ,终止转录 检测目的基因是否导入受体细胞 ① 载体 与 表达载体 的区别：均有标记基因和复制原点两部分 DNA片段。 表达载体比载体增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构。 注意 ! ② 用到的工具酶： 既用到限制酶切割载体，又用到 DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键。 ③ 启动子、终止子 对于目的基因表达必不可少。 ④ 目的基因不能单独进入受体细胞， 必需以表达载体的方式携带进去。 质粒 DNA分子 限制酶处理 两个切口 四个黏性末端 DNA连接酶 基因表达载体 （重组 DNA分子或重组质粒） 同一种 一个切口 两个黏性末端 三、将目的基因导入受体细胞 1 转化： （ 1） 概念 ： 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内 维持稳定和表达 的过程。 （ 2） 实质 ：基因重组。 2 常用的受体细胞 ： 细菌： 大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌 ； 酵母菌 （真核生物）：生产糖蛋白（干扰素）时作受体细胞； 植物细胞：体细胞、卵细胞、受精卵 动 物细胞 ：常用受精卵（全能性高）。 3 目的基因导入受体细胞的原理： 借鉴 细菌或病毒 侵染 细胞的途径。 生物种类 植物细胞 动物细 胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法 基因枪法 花粉通道法 显微注射法 Ca2＋ 处理法 受体细胞 一般为体细胞 受精卵 一般原核细胞 目的基因导入受体细胞的方 法 将目的基因导入植物细胞 （ 1）农杆菌转化法 特点 : 能感染 双子叶植物 和 祼子植物 ,对单子叶植物无感染能力 Ti质粒 的 T— DNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上 转化过程 : Ti质粒 目的基因 构建 表达载体 导入 植物细胞 插入 植物细胞染色 DNA 表达 新性状 转入 农杆菌 （受体细胞：体细胞） （ 2）基因枪法 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体 DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 单子叶 植物中较常用 适用于 单子叶植物 （ 3）花粉通道法 植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。 花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加 DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 将目的基因导入动物细胞 方法 : 显微注射技术 操作程序 : 提纯含目的基因表达载体 取受精卵 显微注射 移植到子宫 受精卵发育 新性状动物 常用受体细胞： 受精卵 3 将目的基因导入微生物细胞 ① 微生物作受体细胞原因 ： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 ②常用菌：大肠杆菌 ③常用法： Ca2+处理 （获得感受态细胞） （增大细菌细胞壁的通透性） ④过程： Ca2+处理 大肠杆菌 感受态 细胞 感受态细胞 吸收 DNA 表。