（人教版）生物选修一 5.3《血红蛋白的提取和分离》ppt课件

（人教版）生物选修一 5.3《血红蛋白的提取和分离》ppt课件内容摘要：

1、 高中生物课件（人教课标版） 课题 3 血红蛋白的提取和分离 一、基础知识 ： （一） 蛋白质提取和分离原理 （二）蛋白质提取和分离的方法 1）凝胶色谱法：又称分配色谱法 2）电泳法 （三）缓冲液的作用 二、实验操作实验步骤 样品处理 和粗分离 纯 化 纯度鉴定 血液组成成分 涤 红 细 胞 红蛋白 红蛋白 红蛋白 二、实验操作实验步骤 血液组成成分 涤 红 细 胞 红蛋白 红蛋白 红蛋白 样品处理 和粗分离 纯 化 纯度鉴定 蛋白质提取与分离的依据 蛋白质的物理化学性质差异： 小 （ 1）原理： （ 2）材料：凝胶 大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快； 小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部 2、，路程长，流动慢。 凝胶是 微小的多孔性球体 ，如 葡聚糖或琼脂糖。 内部有许多贯穿的 通道 . 根据相对 分子质量的大小 分离蛋白质的方法 概念： 洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液， 促使蛋白质分子的差速流动。 混合物 上 柱 洗 脱 大分子流动快 小分子流动慢 收 集 大分子 收 集 小分子 2凝胶电泳法： 1）原理： 不同蛋白质的 带电性质 （正电荷或负电荷） 、电量、形状和大小 不同，在电场中受到的作用力 大小、方向、阻力 不同，导致不同蛋白质在电场中的 运动方向 和 运动速度 不同。 2） 影响蛋白质分子运动速度的因素 电泳： 带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 思考 ： 蛋白质为 3、什么带有电荷。 在一定的 蛋白质可解离的基团会带上电荷 2凝胶电泳法： 1）原理： 不同蛋白质的 带电性质 （正电荷或负电荷） 、电量、形状和大小 不同，在电场中受到的作用力 大小、方向、阻力 不同，导致不同蛋白质在电场中的 运动方向 和 运动速度 不同。 2） 影响蛋白质分子运动速度的因素 电泳： 带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 思考 ： 蛋白质为什么带有电荷。 3） 常用电泳方法 琼脂糖凝胶电泳 聚丙酰胺凝胶电泳 加入带负电荷多的 成 “ 蛋白质 ，使蛋白质 迁移速率仅取决于分子大小。 影响蛋白质分子运动速度的因素 决定 运动方向 电场 作用力 形成 阻力 决定 运动速率 电荷性质 4、 电荷量 分子形状 分子大小 由 弱酸 和相应的 强碱弱酸盐 溶解于 水 中。 如 （ 4） 缓冲溶液洗脱剂 作用： 配制： 调节酸和盐的用量 ， 可配制不同 抵制外界酸碱对溶液 思考：如何配制不同 血液组成成分 阅读思考： 1. 血液由 _和 _两部分组成。 2. 血细胞中 _细胞数量最多，细胞的含量最高的化合物是 _。 3. 该化合物是由 _和 _构成的，其中每个亚基中都含有一个能与 _基团。 血浆 血细胞 红细胞 血红蛋白 2条 2条 亚铁血红素 涤 红 细 胞 阅读思考：洗涤的 目的 是什么。 洗涤的 方法 是什么。 洗涤干净 的标志是什么。 血液 100低速离心 2 细胞 血 浆 吸出 5、血浆 红细胞 5倍体积生理盐水 搅拌 10复洗涤 3次， 直至上清液没有黄色 阅读思考： 1. 释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了哪些物质。 2. 为了加速释放过程，采取了什么措施。 目的分析： 1. 蒸馏水 的作用是 _。 2. 加入 甲苯 的作用是 _。 3. 充分搅拌的目的是 _。 使红细胞大量吸水胀裂 溶解红细胞的细胞膜 加速红细胞的破裂 滤纸 过滤 脂类物质 分离过程 红细胞 混合液 高速离心 10离心管 烧杯 有机溶剂 血红蛋白 20磷酸缓冲液 透析的目的是什么。 1除血红蛋白中的小分子杂质 纯化 凝胶色谱操作 教材图 5 19 步骤 操作要求 立刻用磷酸缓冲液洗涤平衡 1 6、2h 洗涤平衡 一次性缓慢倒入；轻轻敲打 装填悬浮液 凝胶颗粒蒸馏水 充分溶胀 根据色谱柱体积计算凝胶用量 色谱柱垂直固定在支架上 配制悬浮液 计算称量凝胶 固定色谱柱 材料： 交联葡聚糖凝胶 20磷酸缓冲液 “ G” 表示什么。 75代表什么。 注意 ： 色谱柱不能内不能有 气泡 ； 装完后，立即用缓冲液洗涤，平衡凝 胶是凝胶 装填紧密 缓冲液 凝胶 注意事项 1. 红细胞的洗涤： 洗涤次数不能过少；低速、短时离心。 装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。 3. 凝胶的预处理 ： 沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡 4. 色谱柱成功标志： 红色区带均匀一致地移动。 知识总结 血红蛋白的提取和分离 蛋白质分子的差异性 凝胶色谱法 原 理 分离过程 凝胶电泳法 缓冲溶液 组 成 作 用 蛋白质的 提取分离 样品处理 粗 分 离 纯 化 纯度鉴定。