家禽育种公司保健中心作业指导书(编辑修改稿)

家禽育种公司保健中心作业指导书(编辑修改稿)内容摘要：

基上的生长特性及菌落形态特性。 对某些细菌（如多杀性巴氏杆菌），还应打开培养基平皿盖闻味，检查是否有特殊的气味产生。 结合临床病变、细菌的染色特性、细菌在培养基上的生长特性、溶血性等，可初步鉴定细菌的种类。 必要时需做一系列的生化试验和血清学试验，对分离菌做详细的鉴定。 细菌和霉菌 一：孵化厅细菌监测技术 ： （棉试子涂擦检验法） :培养基及器械 (皿 )数量的准备应根据送检计划事先进行，凡与被检样品 直接接触的物品 :平皿、吸管、生理盐水等，必需经过高压灭菌处理及紫外线消毒。 培养基 : A:营养琼脂培养基 (NA.) 、 B:麦康凯琼脂培养基 (Mac.)、 C:高盐甘露醇琼脂培养基 (MSA.)、 D:霉菌琼脂培养基 (MM)、 E:沙门氏志贺氏琼脂培养基 ()、 F:四硫磺酸钠增菌液 (TTB.)、 G:三糖铁琼脂斜面培养基、 H:赖氨酸铁琼脂斜面培养基、 I:尿素及其它常见生化试验管、 I:沙门氏菌属血清、 器械 (皿 ): A..水浴锅 :向水浴锅内加入纯净水适量 ,温度调至 55℃。 2 毫升吸管、 10 毫升吸管、平皿。 :灭菌盐水、液泵、记号笔、试管架、塑料桶等。 : 登记、编号 : 化验室接到样品后，首先根据送检单对其进行清点和簦记。 同时将所有样品进行统一化验编号 ,并 用记号笔标记在相应的试管上，并依次排在试管架上。 操作人员必须双手消毒、更换工作服、鞋、帽、戴口罩进入无菌室。 稀释 : 在无菌室内将全部试管盖儿打开 ,每管内加入 4 毫升灭菌盐水 ,浸泡 510 分钟。 标号 : 加样前先要将棉拭子的编号标记在平皿上 ,每个棉拭子使用四个平皿。 加样 : 用 2 毫升吸管在浸有棉拭子的试管中反复吸打使之均匀，然后吸取 2 毫升稀释液，分别加入对应编号的四个平皿内 ,每个平皿 毫升。 分组 :加样完 毕 ,要将全部平皿分成四组放置，使每组的编号完全一样，即每个棉拭子占用的四个平皿各为一组。 倾注培养基 : 将水浴锅中冷却到 4852℃的 NA、 Mac、 MSA、 MM 四种液体培养基分别倾注到四组平皿中，每种培养基倾注一组，每个平皿 15 毫升，倾注后摇匀冷却。 培养 :待凝固后倒置于 37℃恒温箱中培养。 . 沙门氏菌属的检验 : 将试管中的 2 毫升液体连同拭子加入盛有 20ml 四硫磺酸钠亮绿增菌液（ TTB）的三角烧瓶中，置于 37℃恒温箱内增菌 24 小时。 取增菌液一环划线接种于沙门氏志贺氏琼脂培养基 (SS)板上，然后将其置于 37℃恒温箱内继续培养。 观察其菌落形态是否有可疑沙门氏菌落 ,若有无色半透明。 产硫化氢菌株有的菌落中心带有黑色 ,即为沙门氏可疑菌落。 如无典型可疑菌落应再继续培养 24 小时。 筛选试验 : 在沙门氏志贺氏琼脂平板至少应选出 2 个典型或可疑沙门氏菌落分别接种于尿素试管培养基中并穿刺、划线于三糖铁琼脂培养基试管中 .(为了防止遗漏 ,一般应多挑几个菌落进行培养 )于 37℃恒温箱中培养 24 小时 (必要时可 延长止 48 小时 )观察其菌落形态及生化反应。 表 1 三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶培养基筛选 三糖铁琼脂 赖氨酸脱羧酶 初步判断 斜面 底层 产气 硫化氢 K A +() +() + 可疑沙门氏菌属 K A +() +() _ 可疑沙门氏菌属 表 2 三糖铁琼脂和尿素酶琼脂筛选 三糖铁琼脂 尿素酶 琼 脂 初步判断 斜面 底层 产气 硫化氢 K A +() +() _ 可疑沙门氏菌属 A A +() +() _ 可疑亚 利桑那菌属 注 ： K:产碱。 A: 产酸。 ＋ : 阳性反应 － :阴性反映 (－ ): 少见反应 : 生化试验 : 将符合表 1 表 2 可疑沙门氏菌属的三糖铁琼脂及尿素培养特性的应再进一 步做生 化试验及沙门氏菌属的因子血清鉴定试验。 按表 3 进行生化试 表 3. 沙门氏菌属生化反应 序号 生化项目 沙门氏菌反应 1 尿素酶试验 － 2 V－ P 试验 － 3 赖氨酸脱羧酶试验 ＋ 4 吲哚试验 － 5 丙二酸钠试验 － 6 卫矛醇试验 反应不定 所有生化试验管均于 37℃培养 24 小时。 生化试验结果符合表 3 沙门氏菌特性的按 进行。 血清学鉴定试验 : 检查培养物有无自凝性 在洁净的玻片上加一滴生理盐水 ,将待检培养物混合于生理盐水滴内 ,使其成为均一性的浑浊悬液 ,将玻片轻轻摇动 ,在黑色背景下观察其凝集反应。 如菌体 彼此相凝集成明显或较明显的小颗粒状物，即可 认为有自凝性。 反之无自凝性。 用沙门氏诊断血清做进一步的血清学鉴定 . 对无自凝性的培养物 ,先以多价“ O”血清代替生理盐水 ,在 2 分钟内判断 结果。 如为阳性结果以单“ O”血清进一步进行分群试验。 : 菌落计数 : 培养 24 小时后取出营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、霉菌琼脂培养基、高盐甘露醇琼脂培养基。 营养琼脂培养基记数所有菌落为总菌数；麦康凯琼脂培养基记数粉红色菌落数，通过生化鉴定大肠杆菌；霉菌琼脂培养基置于室温下再经过 24小时记数霉菌数。 不同的曲霉分生孢子的颜色不一样 ,有黄、兰、青、黑绿、棕等色；镰孢酶的菌丝有隔 ,产生在菌丝孢子上的分生孢子 ,大分生孢子呈镰刀状 ,有的呈豆角状。 和高盐甘露醇琼脂培养基也置于室温下经过 24 小时后观察其菌落形态，对培养基上长出的圆形、光滑、隆起的金黄色菌落 ,染色镜检鉴定葡萄球菌。 每一平板上的菌落数乘以 8 即为每个棉试子的含菌量。 检验标准 : 总菌数 60 个 /枚 大肠杆菌 : 0 沙门氏菌 : 0 萄葡球菌 : 0 霉菌 : 0 2．空气中细菌的检验 ： 采样 :见样品采集方法中孵化厅空气样品一项 : : 菌落计数 : 培养 24 小时后取出营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、霉菌琼脂培养基、高盐 甘露醇琼脂培养基。 营养琼脂培养基记数所有菌落为总菌数；麦康凯琼脂培养基记数红色菌落数，通过 生化鉴定大肠杆菌。 霉菌琼脂培养基置于室温下再经过 24 小时记数霉菌数；高盐甘露醇琼脂培养基也置于室温下经过 24 小时后观察其菌落形态，对培养基上长出的圆形、光滑、隆起的菌落染色镜检鉴定葡萄球菌。 检验标准 : A: 总菌数 30 B: 大肠杆菌 5 C: 沙门氏菌 0 D: 霉 菌 2 E: 葡萄球菌 2 3． 工作间表面及设备表面检验 :培 养基及器械 (皿 )数量的准备应根据送检计划事先进行，凡与被检样品 直接接触的物品 :平皿、吸管、生理盐水等，必需经过高压灭菌处理及紫外线消毒。 培养基 : A:营养琼脂培养基 (NA.) 、 B:麦康凯琼脂培养基 (Mac.)、 C:高盐甘露醇琼脂培养基 (MSA.)、 D:霉菌琼脂培养基 (MM)、 E:沙门氏志贺氏琼脂培养基 ()、 F:四硫磺酸钠增菌液 (TTB.)、 G:三糖铁琼脂斜面培养基、 H:赖氨酸铁琼脂斜面培养基、 I:尿素及其它常见生化试验管、 I:沙门氏菌属血清、 器械 (皿 ): A..水浴锅 :向水浴锅内加入纯净水适量 ,温度调至 55℃。 2 毫升吸管、 10 毫升吸管、平皿。 :灭菌盐水、液泵、记号笔、试管架、塑料桶等。 : 登记、编号 : 化验室接到样品后，首先根据送检单对其进行清点和簦记。 同时将所有样品进行统一化验编号 ,并用记号笔标记在相应的试管上，并依次排在试管架上。 操作人员必须双手消毒、更换工作服、鞋、帽、戴口罩进入无菌室。 稀释 : 在无菌室内将全部试管盖儿打开 ,每管内加入 4 毫升灭菌盐水 ,浸泡 510 分钟。 标号 : 加样前先要将棉拭子的编号标记在平皿上 ,每个棉拭子使用四个平皿。 加样 : 用 2 毫升吸管在浸有棉拭子的试管中反复吸打使之均匀，然后吸取 2 毫升稀释液，分别加入对应编号的四个平皿内 ,每个平皿 毫升。 分组 :加 样完毕 ,要将全部平皿分成四组放置，使每组的编号完全一样，即每个棉拭子占用的四个平皿各为一组。 倾注培养基 : 将水浴锅中冷却到 4852℃的 NA、 Mac、 MSA、 MM 四种液体培养基分别倾注到四组平皿中，每种培养基倾注一组，每个平皿 15 毫升，倾注后摇匀冷却。 培养 :待凝固后倒置于 37℃恒温箱中培养。 . 沙门氏菌属的检验 : 将试管中的 2 毫升液体连同拭子加入盛有 20ml 四硫磺酸钠亮绿增菌液（ TTB）的三角烧瓶中，置于 37℃恒温箱内增菌 24 小时。 取增菌液一环划线接种于沙门氏志贺氏琼脂培养基 (SS)板上，然后将其置于 37℃恒温箱内继续培养。 观察其菌落形态是否有可疑沙门氏菌落 ,若有无色半透明。 产硫化氢菌株有的菌落中心带有黑色 ,即为沙门氏可疑菌落。 如无典型可疑菌落应再继续培养 24 小时。 筛选试验 : 在沙门氏志贺氏琼脂平板至少应选出 2 个典型或可疑沙门氏菌落分别接种于尿素试管培养基中并穿刺、划线于三糖铁琼脂培养基试管中 .(为了防止遗漏 ,一般应多挑几个菌落进行培养 )于 37℃恒温箱中培养 24 小时 (必要 时可延长止 48 小时 )观察其 菌落形态及生化反应。 表 1 三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶培养基筛选 三糖铁琼脂 赖氨酸脱羧酶 初步判断 斜面 底层 产气 硫化氢 K A +() +() + 可疑沙门氏菌属 K A +() +() _ 可疑沙门氏菌属 表 2 三糖铁琼脂和尿素酶琼脂筛选 三糖铁琼脂 尿素酶 琼 脂 初步判断 斜面 底层 产气 硫化氢 K A +() +() _ 可疑沙门氏菌属 A A +() +() _ 可疑亚 利桑那菌属 注 ： K:产碱。 A: 产酸。 ＋ : 阳性反应 － :阴性反映 (－ ): 少见反应 : 生化试验 : 将符合表 1 表 2 可疑沙门氏菌属的三糖铁琼脂及尿素培养特性的应再进一 步做生 化试验及沙门氏菌属的因子血清鉴定试验。 按表 3 进行生化试 表 3. 沙门氏菌属生化反应 序号 生化项目 沙门氏菌反应 1 尿素酶试验 － 2 V－ P 试验 － 3 赖氨酸脱羧酶试验 ＋ 4 吲哚试验 － 5 丙二酸钠试验 － 6 卫矛醇试验 反应不定 所有生化试验管均于 37℃培养 24 小时。 生化试验结果符合表 3 沙门氏菌特性的按 进行。 血清学鉴定试验 : 检查培养物有无自凝性 在洁净的玻片上加一滴生理盐水 ,将待检培养物混合于生理盐水滴内 ,使其成为均一性的浑浊。