（人教版）选修一生物 5.3《血红蛋白的提取和分离》导学案

（人教版）选修一生物 5.3《血红蛋白的提取和分离》导学案内容摘要：

2、生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的 进行的，为了 ，必须保持体外 的 体内的。 （三）电泳1、电泳是指。 2、许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的 ，这些基团会带上。 在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷 的电极移动。 电泳利用了待分离样品中各分子 的差异以及分子本身的 、 的不同，使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中各种分子的分离。 3、两种常用的电泳方法是 和 ，在凝胶中加入 泳速率完全取决于 ，因此，在测定蛋白质分子量时通常使用。 二、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步： 、 、 和。 （一）样品处理1、红细胞的洗涤：洗涤红细胞的目的是 ， 4、二）粗分离：透析取 1血红蛋白溶液装入 中，将透析袋放入盛有 300物质的量的浓度为 20 的（，透析 12h。 透析可以去除样品中 的杂质，或用于更换样品的缓冲液。 （三）纯化：凝胶色谱操作1、制作凝胶色谱柱2、装填凝胶色谱柱装填前将色谱柱 固定在支架上。 因为干的凝胶和用缓冲液平衡好的凝胶的体积 ，所以装柱前需要根据色谱柱的内体积计算所需要的凝胶量。 装填时凝胶要 缓慢倒入色谱柱内，装填时要轻轻敲动色谱柱，使凝胶装填 ，色谱柱内不得有 存在，一旦发现，必须重装。 装填完后， 连接缓冲液洗脱瓶，在约 50的操作压下，用 300质的量浓度为 20 的 （分洗涤平衡凝胶 12h，使凝胶。 3、样品的加入和 5、洗脱准备：打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的的缓冲液与凝胶面 ，关闭出口。 加样：用吸管小心地将 1析后的样品加到色谱柱的顶端，注意。 加样后打开下端出口，直到样品 后，关闭下端出口。 洗脱：小心加入物质的量的浓度为 20 的 （适当高度，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口进行洗脱。 待 接近色谱柱 时，用试管收集。 （四）纯度鉴定： 三、操作提示1、 红细胞的洗涤 洗涤次数、离心速度与离心时间十分重要。 洗涤次数过少，无法除去 ；离心速度过高和时间过长会使 一同沉淀，达不到分离的效果。 2、色谱柱填料的处理 商品凝胶使干燥的颗粒，使用前需直接放在洗脱液中膨胀。 为了加速膨胀，可以将加入洗脱液的湿凝胶用 7、际上是一些微小的多孔球体，小球体内部有许多贯穿的通道。 相对分子质量较大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，只能分布在颗粒之间，通过的路程较短，移动速度较快；相对分子质量较小的蛋白质分子比较容易进入凝胶内的通道，通过的路程较长，移动速度较慢。 因此，样品中相对分子质量较大的蛋白质先流出，相对分子质量中等的分子后流出，相对分子质量最小的分子最后流出，从而使各种相对分子质量不同的分子得以分离。 如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内 ，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过， ，影响分离的效果。 （二）练习1答：凝胶色谱法也称为分配色谱法，它是根据分子量的大小分离蛋白质的方法之一。 所用的凝胶实际 8、上是一些微小的多孔球体，这些小球体大多数是由多糖类 化合物构成，小球体内部有许多贯穿的通道，当一个含有各种分子的样品溶液缓慢流经时，各分子在色谱柱内进行两种不同的运动，即垂直向下的运动和无规则的扩散运动。 相对分子质量 的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，只能分布在颗粒之间，通过的路程 ，移动速度 ；相对分子质量 的蛋白质分子比较容易进入凝胶内的通道，通过的路程 ，移动速度。 因此，样品中相对分子质量较大 的蛋白质先流出，相对分子质量中等的分子后流出，相对分子质量最小的分子最后流出，这种现象又叫分子筛现象。 2答：在一定范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液 生明显变化的作用叫做缓冲作。