中国药科大学本科生毕业论文(设计)开题报告_图文

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中国药科大学本科生毕业论文(设计)开题报告_图文 中国药科大学本科生毕业论文（设计）开题报告姓名 陈海 学号 0342410 专业 生物技术 指导教师 高向东课题名称 内皮抑素 饰产物的药代动力学初步研究课题性质 基础研究 应用课题 设计型 调研综述 理论研究 开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于 2000 字）一、实验背景研究表明肿瘤的形成、生长、浸润和转移的关键是肿瘤的血管化。 1971 年, 想通过抑制肿瘤血管生成,使肿瘤细胞因缺血、缺氧而大部分死亡,从而延缓晚期肿瘤生长,延长患者带瘤生存期,并抑制转移灶生长,推迟复发。 近年来寻找有效的血管生成抑制剂( 为肿瘤研究领域的一个热点, 其中以O为理想, 他们在血管内皮细胞瘤细胞株)的细胞培养上清液中经纯化获得一种新的、分子量为20特异性抑制血管内皮细胞增殖,尤其对肿瘤诱导的血管新生具有强大抑制作用, 对其他非内皮细胞系无作用,因此被命名为内皮抑素（在细胞水平上,内皮抑素对肿瘤血管内皮细胞增殖有选择性的抑制作用。 它可以抑制肿瘤血管内皮细胞成纤维细胞生长因子(诱导下的增殖,但对血管内皮细胞生长因子(刺激增殖的内皮细胞作用不明显,并对静止的血管内皮细胞无作用;抑制刺激因子诱导下的血管内皮细胞迁移,通过体外试验发现,内皮抑素不仅抑制血管内皮细胞迁移,还可抑制肿瘤细胞在人工基底膜凝胶中的迁移。 它也可诱导激的血管内皮细胞凋亡。 在组织器官水平上,内皮抑素可以抑制鸡胚绒毛尿囊膜、大鼠角膜、动脉环体外培养的新血管生成,对鸡胚绒毛尿囊膜血管生长的抑制率达60 %。 在整体水平上,内皮抑素对动物移植肿瘤有抑制作用,具有对不同类型的肿瘤抑瘤率相近、抑制率高、抑瘤作用呈良好的量耐药倾向、无不良反应等特点。 国内外大量的文献报道表明内皮抑素能够有效控制非小细胞性肺癌、结肠癌、脑胶质瘤、纤维瘤、间皮瘤及淋巴瘤等各种实体瘤的生长、浸润和转移。 虽然出现过缺乏抑制作用的少数案例，但总体说来，期临床研究发现rh使剂量高达600mg/m 2也未发现剂量限制性毒性，并已初步观察到肿瘤对其有一定的反应。 国外的期临床实验表明性很小，对于转移性神经内分泌肿瘤可能有效。 国外的临床实验没有继续下去，可能原因是国外采用酵母表达，成本太高。 但是国内在此方面的研究取得了突破性进展。 罗永章等在天然仅使 定性提高，半衰期延长， 而且生物活性增加。 他们已完成了临床期实验，表明改造后的内皮抑素与化疗药物延长患者的肿瘤进展时间。 该药物已于今年正式上市，商品名为恩度。 目前研究表明, 内皮抑素抑制血管生成可能的机制为: 与血管生成刺激因子竞争性结合生长因子信号传导系统中的硫酸肝素蛋白多糖受体, 发挥抑制内皮细胞增生和肿瘤生长的作用; 直接与血管内皮受体结合, 通过与血管内皮细胞膜结合, 阻碍具有血管内皮细胞的5 亚单位的整合素机能, 抑制血管内皮细胞的达等, 从而抑制内皮细胞的增生; 内皮抑素可阻碍增生的内皮细胞与其基质蛋白的作用,从而诱导内皮细胞凋亡; 同时减少抗凋亡蛋白的量, 促进血管内皮细胞凋亡加速, 从而抑制肿瘤血管形成; 引起内皮细胞而抑制内皮细胞增殖; 可抑制血小板源性生长因子( 介导的血管周细胞的再生。 为药物用于临床还存在许多问题：首先是它易被机体的免疫系统降解；其次,该药低氧环境易分解,不利于它在肿瘤局部生物活性的发挥；第三，很难大量制备稳定的具有生物活性的蛋白,因为内皮抑素是一个极不稳定的蛋白,容易失活；最后,应用内皮抑素治疗肿瘤是一个长期的过程,一旦停药肿瘤又会生长,而且由于药物分布问题,人体内用量要比动物实验大得多,所以需要重复注射大量的内皮抑素解决上述困难,必须改进治疗策略。 近年来采用聚乙二醇( 饰可以解决或缓解蛋白质和多肽类在药用过程中存在的诸多问题。 药物的聚乙二醇修饰(即将活化的聚乙二醇通过化学方法偶联到蛋白质、多肽、小分子有机药物和脂质体上。 1977 年果修饰后的蛋白质疗效优于未修饰的原型药物。 此后的二、三十年,聚乙二醇修饰技术得到了迅速的发展,成功地开发出聚乙二醇修饰的酰苷脱氨酶(、天冬酰胺酶( - 、干扰素- 2b( 2b) 、干扰素- 2a( 2a) 、重组人粒细胞集落刺激因子(等蛋白质药物,以及修饰的喜树碱(阿霉素脂质体等，更有20 多个药物正在进行临床研究。 药用蛋白质经低或消除免疫原性,有效地延长半衰期,很大程度上保留生物活性,大大提高药用蛋白质的生物利用度。 固相酶免疫测定方法在1971 年最初建立时称为酶联免疫吸附剂测定（，简称一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法，由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素，以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测，既可以做定性试验也可以做定量分析等优点，已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。 目前接法、竞争法三类。 竞争性测抗原多，则形成非标记复合物多，酶标抗原与抗体结合就少，也就是酶标记复合物少，因此，显色程度与待测物含量成反比。 本实验拟用竞争性考察其半衰期的变化。 二、实验目的和意义分别用 内皮抑素进行修饰，通过竞争性 方法对修饰前后的内皮抑素（行药代动力学的初步研究，考察其半衰期( T 1/2 )的改变情况。 三、实验内容1、给药和采血15只大鼠分成3组，分别S、尾静脉( 注射。 于0、1050h、4h、8h、12h、24h、48入肝素抗凝，半小时内离心取血浆。 立即测定或分装冻存于避免反复冻融。 2、竞争性）将标准品（S、S）稀释成500、125、ng/为不加蛋白。 将标准品0个标准品做复孔，即测2次）入相应孔内。 （2）待测标本：每个样本以100000制备好的血清标本加100求测复孔）。 （3）每孔加入25复溶的上进行下一步。 （4）每孔中加入25封板膜封板以免蒸发，于室温孵育3h。 （5）洗涤：轻轻去除封板膜，洗涤5次。 每孔加已稀释的洗液250次洗完要将板彻底轻拍干。 洗第5次时，每孔加已稀释的洗液250除孔内任何多余液体。 （6）将显色液孔加入50次封板，室温孵育307）轻轻去掉封板膜，按上述方法再洗板5次。 （8）每孔加入200温孵育约209）在孵育的20酶标仪49010）保存和计算结果。 3、数据处理方法学研究所得结果以 x ±据所测间数据,取各时点5只小鼠血药浓度的均数,用、受试样品稳定性考察 配制分装成2 份, 1 份用4 倍稀释血浆配成8、32、125、500 ng/种浓度立即测定,作为零时的药物浓度;另1份- 20保存, 1 临用前配制的倍稀释血清标准曲线作为100%,计算每次测定浓度,结果以减少百分数表示。 四、参考文献1in of 0;312(5):594Y.,J,et of 1(2)：2522583.,.,.,et 7(4):995M,J.,.,.,et of of 131(1):97.,.,.,et by 2(3):756.,.,.,et by 2001 6;288(5):1149.,.,.,et of by 5;486(3):247of in 3(6):265杨林，王金万，8（2）：13814110王金万，孙燕，盲、对照、多中心（4）：283 年 月 日指导教师意见：指导教师签名： 年 月 日所在教研室审查意见：负责人签名： 年 月 本课题的深度、广度及工作量的意见和对论文结果的预测；。