蛋白质类药物聚乙二醇化技术平台的建立及聚乙二醇化重组干扰素的研制：桂彬

蛋白质类药物聚乙二醇化技术平台的建立及聚乙二醇化重组干扰素的研制：桂彬内容摘要：

蛋白质类药物聚乙二醇化技术平台的建立及聚乙二醇化重组干扰素的研制：桂彬 蛋白质类药物聚乙二醇化技术平台的建立及聚乙二醇化重组干扰素的研制指导教师：姚文兵教授小组成员：赵 慧、林啸尘、包欣晨王 强、桂 彬、慈天元2008年 11月 15日非天然氨基酸定点改构技术平台的建立及其应用（国家 863项目，编号 2007师简介姚文兵， 国家教学名师，中国药科大学副校长、教授、博导。 研究领域为生物技术药物的分子修饰及生物新 药的研制。 主持完成国家 “ 863” 课题 2项、国家自然科学基金 2项、省部级科研重点课题 10多项，主持国家级、省级教改研究课题 10多项。 担任教育部高职高专药品类专业教学指导委员会主任委员，教育部药学类专业教学指导委员会秘书长，全国高等医学教育学会药学教育研究会副理事长，国家生命科学与技术人才培养基地管理委员会成员，国家食品药品监督管理局新药评审委员、保健食品评审委员等。 蛋白质非天然氨基酸的引入及聚乙二醇定点修饰研究（国家自然科学基金，批准号： 30672559）蛋白质与多肽类药物聚乙二醇修饰研究（教育部“新世纪优秀人才支持计划”项目，批准号： 酸酶分子修饰及其构效关系研究（国家自然科学基金 编号 30772679）蛋白质类药物聚乙二醇化技术平台的建立及聚乙二醇化重组干扰素的研制（国家 863项目，编号 2004目与团队简介大项目： 蛋白质药物聚乙二醇化技术平台的建立及聚乙二醇化重组人干扰素的研制（国家 863重大专项）小课题： 物工程赵 慧06级 基 础药学理科基地慈天元05级 生命科 学与 技 术 基地包欣晨05级 生物技 术林啸尘06级 生命科 学与 技 术 基地桂 彬05级药学王 强创新小组共有六名成员，基本情况如下：课题背景聚乙二醇化 (上世 纪 70年代后期逐 渐发 展起 来 的一 项热门 技 术 ,目前已用于多 种蛋白 质药 物的修 饰。 天然蛋白 质类药 物的缺点血浆半衰期短 引起免疫反应改善药代动力学性质 减少免疫反应聚乙二醇化质谱法 准确 ,但样品要求高电泳法 易于操作 ,速度较快丙 烯酰胺 凝 胶电 泳 ,兼有 电 泳和分子 筛双 重作用 ,其 电 泳行 为与 蛋白质所带电荷 和 蛋白质分子量 都有 关。 二 烷 基磺酸 钠 ,加入后 迁 移率只 与 分子量 有 关。 实验 室 测 蛋白 质课题背景分子量 测 定课题背景白 质 的 相对迁移率 白 质 分子量 性关 系：)(lo g 4400y = 过 程中 ,蛋白的分子量可用 标 准曲 线进 行 测 定标 准曲 论分子量为 39通过此方法得到的表观分子量接近 60差很大。 课题背景寻找一种 当用传统的蛋白标准曲线计算出现了明显的误差，而 目前国内外尚没有文献对此进行校正课题展开蛋白质的电泳行为符合线性关系*S. B., L. D., 996, 234, 190基于文献和实验固定蛋白改变 定 皮抑素（ 血 清 白蛋白（ 基于以上资料课题展开第一道 二道 2000 第四道 000 第六道 尿酸酶 +200S+200 第八道 30酸酶 25十道 实验 一课题展开电 泳 实验 二第一道 0二道 000四道 00五道 40六道 00r 八道 00十道 蛋白的分子量 既 不符合蛋白的 标 准曲 线 ，又不符合 准曲 线 用蛋白 标 准曲 线 算得的 结 果 为 正 误 差，即 > 曲 线 算得的 结 果 为负误 差，即 < 观分子量变大 泳 过 程中分离系 数 、 胶浓 度和分子半 径对 分子 迁 移行 为 的影 响 ， 并 指出分子 与胶 体的 纤维网状结构 的 碰 撞次 数 服 从 根据模型，分子的 迁 移率 与胶浓 度服 从 公式： 适用于非球形的分子）样可以帮助我们得到更好的实验结果根据这个公式，我们对 15个样品的数据又进行了处理经过 系列推 导 ，我 们 得出： K× (，两组曲线均呈现良好的线性关系公式探索蛋白部分的迁移行为与 受对方的影响公式探索123为实验室提供快速简便的测定聚乙二醇化蛋白质分子量的方法。 可以检测蛋白质的聚乙二醇修饰度。 为聚乙二醇化蛋白质类药物新药申报提供一种分子量确证的方法。 公式应用传统 染色方法染色方法改进步 骤固定 3染 10脱色 4 8碘 染 斯亮 ,带来误 差是否可以合二为一 ,快速同步染色。 碘 染 考 染方案一结 果 :胶 很快染上 颜 色 ,而且 脱 色 时间 明 显减 少 问题 : 变 脆 ,容易出 现 裂 缝固定 剂 45 12045 水定容 100 剂 45 左右 45 120 斯亮 蓝 4512. 5水定容 100 剂 45 :蛋白 质 、 蛋白质 均被染色，但凝 胶 染色后依 旧缩 水 严 重。 方案二染色方法改进将 乙醇 改 为 甲醇固定 剂 45 120 斯亮 蓝 4512. 5水定容 100 剂 45 :缩 水 问题 也得到 缓 解，使得此方法更成熟， 实 用性更强。 染色方法改进 棕黄色蛋白质 : 深蓝色复合物分子 : 40于：染色方法改进成果总结建立了用 药物生物技术 投稿一篇，已接受；完成英文论文一篇，已投稿3了解科研性实验的过程回顾与收获学习聚乙二醇化的知识锻炼创新性思维的能力提高实践动手能力培养团队协作精神学会经费的使用与管理从 07年 7月正式进入实验室，到 08年 9月项目结题，蓦然回首，我们已走过一年多的路 致 谢衷心感谢学校提供创新实验的机会，以及实验过程中对我们的所有支持。 感谢姚文兵老师的悉心指导。 感谢实验室各位师兄师姐的指导与帮助。 指导教师：姚文兵教授小组成员：赵 慧、林啸尘、包欣晨王 强、桂 彬、慈天元2008年 11月 15日。