免疫学（药学资料）免疫学的应用（2）

免疫学（药学资料）免疫学的应用（2）内容摘要：

免疫学（药学资料）免疫学的应用（2） 第三节 免疫检测一、抗原、抗体的检测抗原抗体反应，又称血清学反应（主要指体外的反应）。 （一）抗原抗体反应的特点1、特异性和交叉反应2、可逆性 (分子表面的结合 ) 非共价键结合 ( 范德华力 分子空间构型的互补程度、静电引力、氢键、疏水性作用 )是分离纯化抗原或抗体的理论依据3、比例性和可见性比例不合适 出现游离的抗原或抗体，小分子的免疫复合物形成，加电解质也不可见；比例合适 出现网格状的大复合物，游离的抗原或抗体少，加电解质，可见；因此，在抗原抗体反应中，为得到肉眼可见的反应现象，需要调整抗原、抗体的比例。 4、阶段性 抗原抗体特异性结合阶段，短 可见反应阶段，长抗原抗体反应的主要影响因素1、抗原和抗体浓度、比例2、电解质在可见反应阶段发挥作用， 、温度常选用 37度，也有 4度。 4、 一般在。 （二）血清学反应的种类1、凝集反应（ 念：颗粒性抗原与相应抗体结合，在适量电解质存在的条件下，形成肉眼可见凝集块的反映。 反应中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。 颗粒性抗原抗体 直接凝集可溶性抗原相应抗体 不凝集可溶性抗原 无关载体抗体 间接凝集类别及应用：凝集反应的原理玻片法血凝反应强度示意图试管法例：伤寒杆菌的诊断 肥达试验 常用载体 苯乙烯乳胶、活性碳、胶体金（二）沉淀反应（ 念：沉淀原、沉淀素类别及应用：1、液体内的沉淀实验 环状沉淀反应、絮状沉淀反应2、凝胶内的沉淀反应 常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙稀酰胺凝胶等。 3、免疫浊度试验淀管内径 2 50 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128各管抗原倍比稀释加入抗血清各管抗体量不变振摇 混匀、 37 孵育沉淀量不同出现沉淀量最多的管为最适比例管轻摇絮 状 沉 示 意 图淀用于两种抗原材料的抗原相关性分析。 “1” 为单一抗原抗体系统。 “n” 为多个抗原抗体系统。 *可以用混合抗原鉴定抗体纯度。 *可以用混合抗体鉴定抗原纯度。 个孔放不同稀释度的相应 流免疫电泳免疫电泳常用此法进行血清的蛋白种类分析。 对于免疫球蛋白缺损或增多的疾病的诊断或鉴别诊断有重要意义。 （三）补体结合试验概念：组成：待检系统、指示系统（四）中和试验 病毒中和试验血清 病毒 细胞 细胞是否感染毒素中和试验血清 外毒素 毒素活性作用是否丧失（五）免疫标记测定技术概念：用具有高敏感度的标记物，标记抗体或抗原后进行的抗原抗体反应。 分类：免疫组化技术、免疫测定常用标记物： 酶、荧光素、同位素等物质大鼠 底物被酶分解后的显色深浅来反应待检样品中抗原或抗体的含量。 1、 常用酶 ： 辣根过氧化物酶（ 性磷酸酶（ 、常用方法： 酶联免疫吸附试验、异硫氢酸荧光素（黄绿色荧光） 95、罗丹明（红色荧光） R 藻红蛋白 疫荧光技术（可在同一标本中测多个抗原或抗体）放射免疫分析法同位素分析的灵敏性 抗原抗体反应的特异性优点： 灵敏度高特异性强精确性好样品用量少测定方法规范、自动化常用同位素： 125I、 131I、 3H、 14C、 32P 放射免疫测定 理免疫胶体金技术 常用抗原抗体反应的相对敏感度 （ /L） 血清蛋白电泳（区带电泳） 1000免疫电泳 50 100单向免疫扩散 10 20双向免疫扩散 10火箭电泳 对流免疫电泳 免疫比浊 补体结合反应 10凝集反应 10 10 10疫细胞的检测 在体外或体内，对机体免疫细胞进行鉴定、计数、功能测定。 1、 免疫细胞的分离自然沉降法密度梯度离心 +花环试验（或黏附试验等）免疫磁珠法 图流式细胞分离术 图 等流式细胞仪分离细胞 2、免疫细胞的计数图 各种血细胞 流式细胞仪检测细胞表面标记3、 免疫细胞功能的测定淋巴细胞转化试验形态学方法、淋巴母细胞计数、 3H胸腺嘧啶核苷 掺入法、 、细胞毒试验、细胞因子检测物活性测定、 PCR。