翁琰 蟾酥脂质微球注射液 体内分析方法的建立

翁琰 蟾酥脂质微球注射液 体内分析方法的建立内容摘要：

翁琰 蟾酥脂质微球注射液 体内分析方法的建立 ：翁 琰专 业：药剂学导 师：唐 星 教授蟾酥脂溶性有效成分 蟾毒灵、华蟾毒和脂蟾毒配基为活性成分， 采用高压均质法制备出的一种抗癌镇痛药物新剂型。 我们以各种稳定性参数为指标，对制剂制备过程中工艺及处方因素进行了研究，并由以上考察结果确定了制剂最终处方及制备工艺。 国和国外的新药研究指导原则都明确地提出了新药的药物动力学研究的技术要求。 本研究建立了蟾酥脂质微球注射液指标成分 蟾毒灵、华蟾毒和脂蟾毒配基的 S/今后考察蟾酥脂质微球注射液在大鼠体内的药代动力学及组织分布过程奠定基础。 研究背景射液脂蟾毒配基华蟾毒配基 C) 脂蟾毒配基 H (R)O 蟾毒灵 (B)蟾毒配基以环戊烷并全氢菲（甾核）为基本骨架， 合物结构色谱条件 ： 色谱柱为 18柱 （ 50m）流速为 0.2 ml·温 35 ，进样室温度 :4 进样量 :5 L。 im 6 0 1 2 2 2 2 2 %01001 1 2 2 2 2 2 %01001 1 2 2 2 2 2 %01001 1 2 2 2 2 2 %01002 2 2 2 1 2 2 1 谱条件 ： 采用电喷雾电离源（ 多重反应监测（ 行定量分析，二级锥孔电压： ，毛细管电压： 3.8 0.1 v，离子源温度： 120 C，脱溶剂气温度： 400 C，脱溶剂气流速： 500 L/孔反吹气流速： 50 L/0 L 水 ,涡旋 1 0 3000 g,10 清液 50 减压旋干残渣 100 水（ 55:45， v/v）涡旋溶解 10 心（ 16000 r/0 上清液5 S/只大鼠的空白血浆 不加内标外，其他按“ 血浆样品处理 ”项下操作，进样 20 l，获得空白样品的色谱图 （见图 A）；将一定浓度的标准溶液和内标溶液加入空白血浆中，依同法操作，获得相应的色谱图（见图 B）；取大鼠给药后的血浆样品，依同法操作，得色谱图 C。 00 L，加三种蟾毒配基混合的标准系列溶液 100 L，配制成相当于蟾毒灵、华蟾毒和脂蟾毒配基血浆浓度为 100，200和 400 ng/ “ 血浆样品预处理 ” 项下依法操作，进样 5 l，记录色谱图；以待测物浓度为横坐标，待测物与内标物的峰面积比值为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归运算，求得的直线回归方程即为标准曲线。 00 “ 标准曲线和线性范围 ” 项下的方法制备低、中、高 3个浓度（三种蟾毒配基血浆浓度分别为 100, 360 ng/质量控制（ 品，每一浓度进行 6样本分析，测定 3天，根据当日的标准曲线，计算 算本法的准确度与精密度，结果表明对于各个化合物日内精密度均小于 日间精密度均小于 对于各蟾毒配基测定的准确度均小于 实验数据表明，测定血浆中三种蟾毒配基的方法符合有关国际规范的要求。 00 “ 标准曲线和线性范围 ” 项下的方法制备低、中、高 3个浓度（ 三种蟾毒配基血浆浓度分别为 100, 360 ng/样品，每一浓度进行 6样本分析。 同时另取空白血浆 200 不加系列标准溶液和内标外，按 “ 标准曲线与线性范围 ” 项下的方法制备上清液，向获得的上清液中加入相应浓度的系列标准溶液 100 0 流混合， 50º渣用100 5 得相应峰面积（ 3次测定的平均值），以每一浓度两种处理方法的峰面积比值计算回收率。 酸乙酯，乙醚：乙酸乙酯（ 5： 1,v/v），正己烷：乙醚（ 3： 2， v/v） ,正己烷：二氯甲烷：异丙醇（ 20： 10： 1，v/v）的萃取效果。 结果表明乙酸乙酯对于三种蟾毒配基的提取回收率最高（ ，但对内标苯海拉明仅为 50%，乙醚：乙酸乙酯（ 5：1,v/v）的提取溶剂对苯海拉明的提取回收率较高（ 95 %）。 因此我们最终选用 乙酸乙酯：乙醚（ 4： 1， v/v）为提取溶剂，将三种蟾毒配基和内标苯海拉明同时提取且回收率都在 70%以上。 次冷冻 解冻循环的稳定性，血浆样品 放置 7天的稳定性以及血浆样品室温放置 2 空白血浆 200 “ 标准曲线和线性范围 ” 项下方法制备 低、高 2个浓度的样品，每一种稳定性考察进行三样本分析。 结果表明样品经过 3次冷冻解冻循环后稳定（ 12%之间），血浆样品 放 7天稳定（ 9%之间），室温放置 2 间）。 C/C/ 理想的内标物为待测组分的同位素标记物 ， 但同位素标记的内标物合成难度较大 ， 成本较高 ， 一般不易获得。 由于仪器波动 ， 碰撞能量在一天当中有所变化 ， 从而导致待测物与内标质谱信号强度的比值发生改变 ， 结果就是 因此 ， 对内标的要求是：当碰撞能量变化而导致组分的信号强度发生改变时 ， 内标物与待测物变化的趋势应基本一致。 实验中选择 苯海拉明为内标 ， 可以满足上述要求 ， 重现性良好。 讨论内标物的选择。 在样品复溶时 ， 一般建议使用初始比例的流动相以免使被分析物色谱带展宽。 然而蟾毒配基的亲水性较差 ， 为了使挥干的样品完全溶解以增强蟾毒配基的响应信号 ，复溶时使用的溶剂为乙腈：水 （ 55： 45， v/v） ,实验结果表明这个比例的溶剂复溶时 ， 被分析物的峰形也较好。 进样体积 ： 进样体积对谱带展宽也有一定的影响 ， 进样体积大于 5 µL 时 ， 峰形较差。 讨论保持峰形。 毒灵 、 华蟾毒和脂蟾毒配基 的S/ S/ 允许同时对多个成分进行定性 、 定量分析；不需要使分析物之间实现完全的色谱分离 ， 使得样品预处理过程简化 ， 同时分析测试时间大为缩短。 S/具有快速的分析样品的特征 ， 非常适用于血浆样品多种组分的同时定量分析。 该法测定三种蟾毒配基的线性范围均为 1 ng/方法的准确度和精密度均符合要求。 该法操作简便 、 快速 ， 每一样品的分离时间仅为 3.0 每天可处理 120 多个血浆样品。 可以将该法用于蟾酥脂质微球注射液的大鼠体内药物动力学及组织分布研究。 小结niversity。