生物制药工艺学－核酸药物

生物制药工艺学－核酸药物内容摘要：

生物制药工艺学－核酸药物 核 酸 药 物四类核酸碱基及其衍生物1核苷及其衍生物2核苷酸及其衍生物3多核苷酸41. 核酸碱基及其衍生物 ; 别嘌呤醇 (Al lo 、巯嘌呤 (M er op 、磺硫嘌呤(T 、氟尿嘧啶等 2. 核苷及其衍生物 ： 腺苷类：腺苷、腺苷甲硫氨酸（ ）、阿糖腺苷 ( A) 等 尿苷类：尿苷、呋喃氟尿嘧啶、氮杂尿苷 (A z au 等 胞苷类：阿糖胞苷 ( C) 、环胞苷、氮杂胞苷等 肌苷类：肌苷、肌苷二醛、异丙肌苷等 脱氧核苷类：氮杂脱氧核苷、脱氧硫鸟苷等 3. 核苷酸及其衍生物 ： 单核苷酸类： 核苷二磷酸类：尿二磷葡萄糖 () 、胞二磷胆碱 ( 核苷三磷酸类： A 核苷酸类混合物： 5 核苷酸、 2 核苷酸、 3 核苷酸等 4. 多核苷酸： 二核苷酸： 、 、黄素腺嘌呤二核苷酸（ F 多核苷酸类： 、 po I:C 、 po :U 、转移因子（ 等 依据结构特点及临床应用情况分类具有天然结构的核酸类物质如：肌苷、 等来源：提取或发酵特点：毒副作用小自然结构碱基、核苷、核酸类结构的类似物如：巯嘌呤、阿糖胞苷、聚肌胞等来源：以核酸类物质为前体通过“化学法”或“酶法”进行半合成特点：毒性较大1、工业用 液热破坏酶冷却到 10心 近 离心 0 心 上清液 调 有生物活性 具有生物活性 R N A 的制备核糖核蛋白的提取：组织匀浆匀浆液0 . 1 4 M N a C L 提取离心上清液（核糖核蛋白）调 p H 4 . 5 ，离心沉淀设法将核酸和蛋白分开（核糖核蛋白）从核糖核蛋白中分离 )乙醇沉淀法：核糖核蛋白 溶于 相用含辛醇的氯仿去蛋白 乙醇 )盐酸胍法：核糖核蛋白 2 4盐酸胍38却至 0心 【提取】【热变性】， 1 5 m i 0 离心上清液【沉淀】乙醇干燥固体 ( 变性 )2. 具有生物活性 制备 动物内脏生理盐水捣碎 1 m i n【负提取】离心 3 0 m i 次沉淀【提取】S D S 乙醇水离心【沉淀】乙醇上层液沉淀 【干燥】固体 D N A ( 粗 ) （有活性）粗品 水溶解加 5 S D S 溶液至 1 / 1 0 体积搅拌 1h ，离心 1N a C l 至 1 核苷酸常用的酶：橘青霉产生的 5磷酸二酯酶橘青霉培养液压滤 酶液【 酶解 】除菌体解液 加热、调 离子交换 】吸附于氯型阴离子树脂分部洗脱 脱氧核苷酸(解 进一步分离 戊糖核苷酸碱水解 ：可制备 3 和 2 核苷酸碱水解 ： 3 和 2 核苷酸 核苷酸3 核苷酸 发酵法生产核苷酸产氨短杆菌发酵生产肌苷酸（ 腺嘌呤营养缺陷型嘌呤核苷酸生物合成途径和代谢调控解腺嘌呤阻遏提）保证 证关键酶 断 断 选获得缺乏 供亚适量的腺嘌呤。 使积累的 大细胞膜通透性选育 敏感的变异株发酵法生产核苷用于发酵生产各种核苷的菌株有以下共同特点： 1 缺失某些酶，造成核苷酸的积累。 2 发酵时必须提供限量的生长因子（如腺嘌呤等），使在一定范围内积累大量的核苷。 3 磷酸单酯酶的活力很强。 生产中多数使用 枯草芽孢杆菌 或 短小芽孢杆菌 为诱变出发杆菌 枯草芽孢杆菌嘌呤核苷酸合成途径黄嘌呤缺陷型（ 嘌呤缺陷型（经诱变缺失 4号酶）（ 嘌呤缺陷型（经诱变缺失 4号酶）腺嘌呤缺陷型（经诱变缺失 6号或 7号酶） （一）（一） （一）1： 7： 积累 肌苷 积累 肌苷 积累 苷枯草杆菌的磷酸单酯酶活力很强 ）。