生物制药工艺学－酶类药物

生物制药工艺学－酶类药物内容摘要：

生物制药工艺学－酶类药物 酶类药物酶的分类酶单 纯 蛋 白 质 （ 多 种 氨 基 酸 组 成 ）结 合 蛋 白 质酶 蛋 白 （ 蛋 白 部 分 ）辅 酶 或 辅 基（ 非 蛋 白 部 分 ）金 属 ： 如 C 、 M 金 属 有 机 物 ： 如 铁 朴 啉不 含 金 属 的 有 机 物如 ： 烟 酰 胺 、 V B 2 等 的 衍 生 物酶胞 外 酶胞 内 酶游 离 酶结 合 酶酶类药物：依照其功效和临床应用分类 1. 消化酶类 胰酶、胰脂酶、胃蛋白酶、淀粉酶 、纤维素酶 等 2. 消炎（抗炎）、粘痰溶解酶类 胰蛋白酶、糜蛋白酶、糜胰蛋白酶、胶原酶、 菠萝蛋白酶、溶菌酶、玻璃酸酶、 D N 3. 循环酶类 抗凝酶：链激酶、尿激酶、纤溶酶 止血酶：人凝血酶、蛇毒凝血酶、促凝血酶原激酶 血管活性酶：激肽释放酶、弹性蛋白酶 4. 抗 肿瘤 酶 天冬酰胺酶、谷氨酰胺酶 5. 其它生理活性酶 青霉素酶、尿酸酶、细胞色素 C 酶类药物的提取和纯化原料选择生物材料的预处理 提取 浓缩 纯化 结晶 动物材料的预处理：（ 1）机械法： 有绞碎、刨碎、匀浆、研磨、超声波、挤压等方法，有些酶用机械法处理后仍不能有效的提取，可结合其他处理法。 （ 2）冻融： 冷到 左右，再缓慢溶解至室温，如此反复多次。 由于细胞中冰晶的形成，及剩下液体中盐浓度的增高，能使细胞中颗粒及整个细胞破碎，使酶释放出来。 （ 3）丙酮粉： 组织经丙酮迅速脱水干燥制成丙酮粉，不仅可以减少酶的变性，同时因细胞结构成分的破碎使蛋白质与脂质结合的某些化学键打开，促使某些结酶释放到溶液中。 材料的预处理酶胞 外 酶胞 内 酶游 离 酶结 合 酶2. 微生物材料的预处理 对于微生物材料提取胞内酶需将菌体细胞破壁，制成无细胞的悬液后再行提取。 （ 1 ） 干燥法： 干燥后菌体产生自溶。 1 ） 空气干燥法：适合于热稳定性好的酶。 2 ） 真空干燥法：适合细菌。 3 ） 冷冻干燥：适合于较敏感的酶。 （ 2 ） 机械法 （ 3 ） 酶法处理 酶的浓缩（ 1）工业上： 超滤、真空减压浓缩、薄膜浓缩、冷冻浓缩（ 2）实验室：除上述方法外，对少量样品可用下列方法1. 用 用聚乙二醇浓缩 步骤 总蛋白（ 总活力单位（× 106） 比活力（ u/ 回收率（） 纯化倍数 匀浆 108286 2 100 1 乙醇粗沉淀 106143 35 50 调 1051 14 120 40 60 C 柱 10590 140 32 70 C 柱 3 × 10460 200 21 100 注意两个问题： 凡用于蛋白质的纯化手段均适用于酶的纯化从大肠杆菌中提取天冬酰胺酶活力回收表酶的结晶 特征： 有序性，对称排列，周期性的重复结构 为空间结构研究提供 其略处于过饱和状态。 （ 1）盐析法（ 2）有机溶剂沉淀法（ 3）复合结晶法（ 4）透析平衡法（ 5）间晶种酶的分离纯化工作中的注意事项1. 防止酶蛋白变性2. 防止复因子丢失 3. 防止酶被蛋白水解酶降解超氧化物歧化酶（ 构特点： 金属酶2个亚基，每个亚基含 1个 在于 中2个亚基，每个亚基含 1个 1个在于 中原核细胞中， 个亚基，每个亚基 1个 4个亚基，每个亚基 1个 然牛血 5 加热数分钟，对热稳定性与溶液离子强度有关对 般 血 9较稳定金属辅基与酶活性关系催化活性无关酶活力是必需的u、 集】离心红细胞【洗涤】2 N a C 血】 3 0 m i n 溶血液【去血红蛋白】乙醇，氯仿，离心上清【分级沉淀】丙酮沉淀液离心上清液【溶解】【热变性】60 70 ， 1 0 m i n ，离心S O D 粗提液【超滤】浓缩浓缩液【柱层析】D E A E - S e p h a d e x A 5 0吸附柱【洗脱】【超滤】p H 7 . 6 的 2 . 5 5 0 m m o l / L P B 干】涤】生理盐水【匀浆】p H 7 . 8 P B S【离心】上清液【热变性】 【离心】65 5 m i 、 65 【分级盐析】【离心】沉淀【溶解】溶液 透析液【柱层析】D E - 5 2流出液【超滤】 【冻干】冻干粉（ 透析】。