嗜酸乳杆菌增菌培养基设计与生长动力学研究_毕业论文(编辑修改稿)

嗜酸乳杆菌增菌培养基设计与生长动力学研究_毕业论文(编辑修改稿)内容摘要：

商 琼脂粉 大豆蛋白胨 细菌学蛋白胨 酵母浸膏 牛肉浸膏 葡萄糖 磷酸氢二钾 盐酸 蔗糖 氯化钠 柠檬 酸三 铵 三水合乙酸钠 酒精 硫酸锰 硫酸镁 蛋白胨，鱼粉 D果糖 乳糖 吐温 80 营养琼脂 麦芽糖 邻苯二甲酸氢钾 月示蛋白胨 胰蛋白胨 酪氨酸 氢氧化钠 酪蛋白胨 L谷氨酸 ,LGlutamic aicd D泛酸钙 盐酸硫胺维生素 B1 核黄素维生素 B2 低聚果糖 蛋氨酸 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 广东环凯微生物科技有限公司 广东环凯微生物科技有限公司 广东环凯微生物科技有限公司 广东环凯微生物科技有限公司 广东环凯微生物科技有限公司 天津市 科密欧化学试剂有限公司 广东汕头市西陇化工厂 广东汕头市西陇化工厂 广东汕头市西陇化工厂 广东汕头市西陇化工厂 广东台山粤侨试剂塑料有限公司 广东台山 粤 侨试剂塑料有限公司 广东台山 粤 侨试剂塑料有限公司 国药集团化学试剂有限公司 国药集团化学试剂有限公司 国药集团化学试剂有限公司 国药集团化学试剂有限公司 上海试剂二厂 广东环凯微生 物科技有限公司 广东汕头市西陇化工厂 上海润捷化学试剂有限公司 山东隆大生物工程有限公司 上海康润生物科技有限公司 上海康润生物科技有限公司 生工生物工程（上海）有限公司 广东化学试剂工程技术研究开发中心 上海源吐生物科技有限公司 天津市博迪化工有限公司 天津市博迪化工有限公司 成都科龙化工试剂厂 成都科龙化工试剂厂 实验主要仪器 表 22 实验主要仪器、设备 设备名称 型号 生产厂商 水浴恒温箱 电子天平 电子分析天平 光栅分光光度计 双目生物显微镜 实验室 PH 计 垂直流超净工作台 干燥 箱 生化培养箱 恒温培养振荡器 电冰箱 立式压力蒸汽消毒器 数码显微镜 ZHWY— 110X T— 200 AB104— N 722 E220LED PHS— 25 ZHJH1112C 101— 3 型 ZSP1270 ZHWH— 2112C 13C— 127TW 银州牌 628B— 2 型 DM85 上海智城分析仪器制造有限公司 美国双杰兄弟（集团）有限公司 Mettier— Toledo Group 上海精密科学仪器有限公司 麦克奥迪实业集团有限公司 上海理达仪器厂 上海智城分析仪器制造有限公司 中华人民共和国上海市实验仪器 总厂 上海智城分析仪器制造有限公司 上海智城分析仪器制造有限公司 柳州市鸿沛电器有限公司 铁岭市医疗器械总厂 克奥迪实业集团有限公司 京君龙实验仪器有限公司 试管规格： 15X150 18X180 17X180 小试管 移液管 1ml、 2ml、 5ml、 10ml 移液枪 1ml、 5ml 载玻片、剪刀、鼻塞比色管、烧杯、玻璃棒、标签、三角瓶、培养皿ＰＨ试纸。 实验方法 发酵菌种的活化 [25] （ 1） MRS培养基配制： 大豆蛋白胨 10g、牛肉膏 10g、酵母浸膏 5g、葡萄糖20g、吐温 80 1g、 磷酸氢二钾 2g、乙酸钠 5g、柠檬三铵 2g、硫酸镁 、硫酸锰，加蒸馏水至 1000mL， 1N HCl调 PH为 ， 121℃ 15分钟灭菌。 （ 2）活化方法 ： 将斜面保藏菌种接种于 10 mL 10％的脱脂乳试管中进行三次活化，然后按体积比 2％的接种量接种于 MRS液体培养基中，以适应菌株在培养基中生长，活化好的菌株放于 4℃冰箱中，备用。 每次测定前，各菌株均在 MRS液体培养基中转接两次，以便菌株活力得到恢复。 培养基碳、氮源的优化 为确定嗜酸乳杆菌最高活菌数时间，以便下面实验进程， 配制 普通 MRS培养基 1000ml， 1N HCl 调 PH 为 ， 用 100ml 量筒分装到 250ml 的三角锥形瓶当中，包扎好 进行高温灭菌（ 121℃ 20 分钟灭菌 ） ，将制备好的培养基置于37℃恒温培养 24h，若无菌生长，即为合格。 取 1 瓶培养基出来 ，在 垂直流超净工作台 按 4%的接种量接种 ，分装到 密封 小试管当中，每管分装 5ml，放到 37℃恒温箱培养，计时 培养 ，每隔两小时测定一次吸光度。 在 MRS 培养基的基础上采用各种不同的碳源和氮源分别取代 MRS 中的碳源和氮源（用量分别为 2%）配制培养基，接种菌种发酵，根据菌体生长情况 （以菌体密度为指标，下同）判断碳源和氮源的优劣。 优选的碳源或氮源之间的复合效果采用复合配比实验确定最佳复合氮源或氮源。 可选的碳源有： 海藻糖、蔗糖、淀粉、麦芽糖、果糖、乳糖、低聚果糖。 可选的氮源有： 培养基 不同 碳氮源 之间搭配 的优化 固定盐溶液的量，对选出的碳源及氮源进行正交实验，确定最优碳氮源之比。 由前面优化的碳源及氮源结果来看，碳源选出三种，分别为乳糖，葡萄糖和果糖，氮源也选出三种，分别是大豆蛋白胨代替牛肉膏，胰蛋白胨代替药理学蛋白胨和大豆蛋白胨代替药理学蛋白胨，实验结果如下： 培养基增 值因子的优化 在普通培养基基础上，添加不同的生长因子 (包括多种氨基酸和维生素等 )，接种发酵，根据菌体生长情况，确定微量元素及生长因子的作用。 添加的生长因子分别为维生素 B1，维生素 B5，谷氨酸，以及蛋氨酸。 实验结果如表 26 培养基 静态培养条件的优化 在试管瓶中，普通培养基为研究基础一设置不同温度、接种量，以 OD 为指标反映菌体增殖情况，并选出优化条件。 培养温度的筛选 将 100 ml的 MRS液体培养基中接人 4． 0％的菌液，分别于 3 3 39℃下恒温培养， 以 OD值为指标反映菌体增值 情况，并选出优化条件。 接种量的确定 按 6％接种量接活化菌液， 39℃下静置培养，测定 OD值。 菌液吸光值（ OD600）的测定 用 721分光光度计在 600nm条件下比色，测定菌液的吸光值。 菌液 pH值的测定 用 PHS— 25 型精密 pH 计在室温下测定 pH 值。 操作步骤 开机前的准备 a） 将电极梗旋入电极梗固定座中； b） 将电极夹插入电极梗中； c） 将 pH 复合电极安装在电极夹上； d） 将 E201C 型 pH 复合电极下端的电极保护套套拔下，并且拉下电极上端的橡皮套使其露出上端小孔； e) 用蒸馏水清洗电极。 仪器的标定 仪器使用前首先要标定。 一般情况下仪器在连续使用时 , 每天要标定一次。 a) 将测量电极插座处拔掉 Q9 短路插头； b) 在测量电极插座处插入复合电极； c) 打开电源开关，仪器进入 pH 测量状态； d) 按“温度”键，使仪器进入溶液温度调节状态（此时温度单位 ℃ 指示），按“ △ ”键或“ ▽ ”键调节温度显示数值上升或下降，使温度显示值和溶液温度一 致，然后按“确认”键，仪器确认溶液温度值后回到 pH 测量状态 (温度设置键在 mV 测量状态下不起作用 )； e) 按“标定”键，此时 显示 “标定 1”“ ”及“ mV”， 把用蒸馏水或去离子水清洗过的电极插入 pH＝ 的标准缓冲溶液中，仪器显示 实测的mV 值， 待 mV 读数稳定后按“确认”键 ， 仪器显示“标定 2”“ ”及“ mV”，把用蒸馏水或去离子水清洗过的电极插入 pH＝ 的标准缓冲溶液中，仪器显示 实测的 mV 值， 待 mV 读数稳定后按“确认”键 ,标定结束，仪器显示“测量”进入测量状态。 注：仪器在标定状 态下，可通过按“ △ ”键选择三种标准缓冲溶液中的任意二种（ pH=、 pH= 、 pH=）作为标定液（选定的标准缓冲溶液会在温度显示位置显示出来）标定方法同上，第一种溶液标定好后仍须按“ △ ”键选定第二种标准缓冲溶液。 f） 用蒸馏水及被测溶液清洗电极后即可对被测溶液进行测量。 一般情况下，在 24h 内仪器不需再标定。 测量 pH值 经标定过的仪器，即可用来测量被测溶液，根据被测溶液与标定溶液温度是否相同，其测量步骤也有所不同。 具体操作步骤如下： ( l ) 被测溶液 与标定溶液温度相同时，测量步聚如下： a) 用蒸馏水清洗电极头部，再用被测溶液清洗一次： b) 把电极浸入被测溶液中，用玻璃棒搅拌溶液，使其均匀，在显示屏上读出溶液。