壳聚糖负载硒代胱氨酸纳米粒子的制备及其体外抗肿瘤活性的研究_毕业论文(编辑修改稿)

壳聚糖负载硒代胱氨酸纳米粒子的制备及其体外抗肿瘤活性的研究_毕业论文(编辑修改稿)内容摘要：

Span80,搅拌均匀后备用。 取500 μL CS溶液缓慢滴加到不同体积的油相溶液中，经超声2 h处理后形成稳定的W/O型微乳液，然后逐渐滴加1%3 ml的戊二醛作为交联剂进行化学交联，超声分散后在室温下搅拌3 h，8000 r/min离心，然后用无水乙醇和石油醚洗涤并离心，最后用蒸馏水清洗，得到乳白色溶液。 （CSNPs）。 (3)不同表面活性剂用量的选择水相：称取分子量为60000的壳聚糖（90%）的壳聚糖500 mg，溶于25 mL 2% 醋酸溶液中配制成20 mg/mL的壳聚糖溶液，搅拌至完全溶解备用。 油相：量取液体石蜡25 mL，加入占其体积2%，3%，4%，5%，6%的Span80，搅拌均匀后备用。 取500 μL CS溶液缓慢滴加到含不同量Span80的油相溶液中，经超声2 h处理后形成稳定的W/O型微乳液，然后逐渐滴加的戊二醛作为交联剂进行化学交联，超声分散后在室温下搅拌3 h，8000 r/min离心，然后用无水乙醇和石油醚洗涤并离心，最后用蒸馏水清洗，得到乳白色溶液。 （CSNPs）。 (4)不同壳聚糖浓度的选择水相：分别称取分子量为60000的壳聚糖（90%）的壳聚糖250 mg, 375 mg, 500 mg, 625 mg溶于25 mL 2% 醋酸溶液中配制成浓度分别为10 mg/mL，15 mg/mL，20 mg/mL，25 mg/mL的壳聚糖溶液，搅拌至完全溶解备用。 油相：量取液体石蜡25 mL，加入占其体积3%( g)的Span80,搅拌均匀后备用。 取500 μL 不同浓度的CS溶液缓慢滴加到油相溶液中，经超声2 h处理后形成稳定的W/O型微乳液，然后逐渐滴加1%的戊二醛作为交联剂进行化学交联，超声分散后在室温下搅拌3 h，8000 r/min离心，然后用无水乙醇和石油醚洗涤并离心，最后用蒸馏水清洗，得到乳白色溶液。 （CSNPs）。 (5)不同交联剂用量的选择水相：称取分子量为60000的壳聚糖（90%）的壳聚糖375 mg溶于25 mL 2% 醋酸溶液中配制成浓度为15 mg/mL的壳聚糖溶液，搅拌至完全溶解备用。 油相：量取液体石蜡25 mL，加入占其体积3% ( g)的Span80,搅拌均匀后备用。 取500 μL CS溶液缓慢滴加到油相溶液中，经超声2h处理后形成稳定的W/O型微乳液，然后分别逐渐滴加2 mL，3 mL，4 mL，5 mL，6 mL 1 %的戊二醛作为交联剂进行化学交联，超声分散后在室温下搅拌3 h，8000 r/min离心，然后用无水乙醇和石油醚洗涤并离心，最后用蒸馏水清洗，得到乳白色溶液。 （CSNPs）。 取500 μL CS溶液缓慢滴加到油相溶液中，经超声2 h处理后形成稳定的W/O型微乳液，%，1%，3%，5%，7%的戊二醛作为交联剂进行化学交联，超声分散后在室温下搅拌3 h，8000 r/min离心，然后用无水乙醇和石油醚洗涤并离心，最后用蒸馏水清洗，得到乳白色溶液。 （CSNPs）。 实验结果与讨论 油相体系对壳聚糖纳米粒子的影响(1)粒径分布及其稳定性的分析表23 ，甲苯作为油相制备所得的纳米粒子粒径与PdI明显比液体石蜡制得的粒子大，这可能与油相体系的粘度有关。 表23 油相体系比对纳米粒子粒径的影响Table 23 Effect of different oil phase on nanoparticles39。 sizesNo.size()PdIparaffintolueneparaffintoluene1 2 3 4 油相体系对纳米粒子粒径的影响Fig. Comparison of different oil phase on nanoparticles’ size 油水比对壳聚糖纳米粒子的影响(1)粒径分布及其稳定性的分析。 从表跟图中可以看出，粒子粒径在油相体积较小时粒径随油相体积增加而增加，当油相体积增加到一定量时，则随着油相体积的增加而减少。 这可能是由于在油相体积较小时，水相纳米粒子分散不均匀，存在纳米粒子粘连现象，而交联剂的加入使得这些纳米粒子粘连现象加重，从PdI和粒径分布图看出，油相体积比小时PdI较大，分散不均匀。 随着油水相体积比增大，水相纳米粒子能够被较厚的油相膜隔离开，降低了在超声分散过程中纳米粒子粘连的几率，从PdI和粒径分布图看出，油水相体积比增大，粒径分布更加均匀，粒径减小。 表24 油水比对纳米粒子粒径的影响Table 24Effect of the ratio of paraffin to CS on nanoparticles 39。 sizesNo.O/W(V/V)Paraffin(ml)Size()PdIA110:15 A220:110 A330:115 A440:120 A550:125 油水比对纳米粒子的影响Fig. Comparison of different ratio of paraffin to CS on nanoparticles39。 sizes 不同油水比纳米粒子的粒径分布Fig. Comparison of different ratio of paraffin to CS on nanoparticles39。 sizes(A1) O/W=10:1 (A2) O/W=20:1 (A3) O/W=30: 1 (A4) O/W=40:1 (A5) O/W=50:1 (2) TEM分析TEM（TEANAI10型透射电子显微镜，philips）观察形貌：将样品分散均匀，用铜网蘸取样品后用磷钨酸进行染色，以确定所得样品微粒的大小、形貌和均匀性，并拍摄有代表性的电镜照片。 结果与纳米粒度仪测得的平均粒径大约相符。 从TEM图中可观察到，当油水比较小时，得到的粒径较小，但是形貌不规则。 随着油水比的增加，粒子逐渐变小，形貌趋于规则的圆球。 这可能是由于油相体积较小，乳化时壳聚糖溶液无法形成规则乳滴，造成交联固化后的产物不规则。 随着油相体积增加，油包水乳液的油膜增厚，形成的乳滴较稳定，且分散均匀，交联固化后的产物呈圆球状。 不同油相比纳米粒子的TEM图Fig. TEM images of nanoparticles39。 shapes(A1) O/W=10:1 (A2) O/W=20:1 (A3) O/W=30: 1 (A4) O/W=40:1 (A5) O/W=50:1 表面活性剂用量对壳聚糖纳米粒子的影响(1)粒径分布及其稳定性的分析。 从表跟图中可以看出，当span80用量为油相体积的3%时，壳聚糖纳米粒子的粒径最小。 在体系中加入乳化剂是为了获得稳定的乳液。 乳化剂的加入，可以在油水界面上形成一层界面膜，降低乳滴的表面能，减少纳米粒子粘连的几率。 乳化剂的用量需要适中，太少(2%)可能导致界面层太薄，膜强度不够。 随着乳化剂用量的增加，界面膜厚度和强度逐渐增加，过量会导致膜层太厚，不容易交联，后续的洗涤也变得困难。 结果表明，控制span80的用量为油相体积的3%可以取得粒径较小的产物。 表25 Span80用量对纳米粒子的影响Table 25Effect of Span80 dosage on nanoparticles39。 sizesNo.PercentageSpan80(g)Size()PdIB12% B23% B34% B45% B56% 不同Span80对纳米粒子影响对比图Fig. Comparison of different Span80 dosage on nanoparticles39。 sizes 不同Span80用量纳米粒子的粒径分布Fig. Comparison of different Span80 dosage on nanoparticles39。 sizes(B1) 2% (B2) 3% (B3) 4% (B4) 5% (B5) 6%(2)TEM 分析TEM观察形貌：将样品分散均匀，用铜网蘸取样品后用磷钨酸进行染色，以确定所得样品微粒的大小、形貌和均匀性，并拍摄有代表性的电镜照片。 结果与纳米粒度仪测得的平均粒径大约相符。 从TEM图中可观察到，当表面活性剂用量较少或较多时，形成的纳米粒子性状不规则，并且粒径较大。 这可能是由于乳化剂过少或过多造成乳滴界面膜不稳定，表面不均匀，存在凹陷，造成在TEM成像时的衬度太低，以致观察不到物像，故需要磷钨酸染色。 当乳化剂用量适中，形成的乳滴分散均匀，交联固化后形成的纳米粒子粒径较小，且分布均匀，TEM成像时衬度足够，故磷钨酸染色后，仍呈黑色圆球。 综上，span80用量为油相体积的3%时，壳聚糖纳米粒子的粒径最小，形貌较好，且分布均匀。 不同Span80用量纳米粒子的TEM图Fig. TEM images of nanoparticles39。 shapes of different Span80 dosage(B1) 2% (B2) 3% (B4) 5% 壳聚糖浓度对壳聚糖纳米粒子的影响(1)粒径分布及其稳定性的分析。 由表24与图28可见，当壳聚糖溶液浓度为10 mg/ml时，产物的粒径达到了微米级。 这可能是由于壳聚糖溶液浓度过低，水相液滴中所含的壳聚糖量极少，乳化分散后与交联剂交联得到的粒子结构松散，不致密，因此粒径较大。 当壳聚糖浓度为15 mg/mL时，产物的粒径最小，分布性最好。 随着壳聚糖溶液浓度的增加，产物的粒径也增加，分散性变差，且颜色加深，由白色逐渐变成棕黄色。 这可能是由于壳聚糖浓度增加，粘度也随着增加，壳聚糖间互相粘连使得乳化时分子较大，最终造成交联得到的粒子粒径也变大。 表26壳聚糖浓度对纳米粒子粒径的影响Table 26Effect of CS concentration on nanoparticles39。 sizesNo.CS(mg/ml)size()PdIC110 C215 C320 C425 壳聚糖浓度对纳米粒子粒径的影响Fig. Comparison of different CS concentration on nanoparticles39。 sizes 不同壳聚糖浓度的纳米粒子粒径分布图Fig. Comparison of different CS concentration on nanoparticles39。 sizes(C1) 10 mg/mL (C2) 15 mg/mL (C3) 20 mg/mL (C4) 25 mg/mL(2) TEM 分析TEM观察形貌：将样品分散均匀，用铜网蘸取样品后用磷钨酸进行染色，以确定所得样品微粒的大小、形貌和均匀性，并拍摄有代表性的电镜照片。 结果与纳米粒度仪测得的平均粒径大约相符。 从TEM图中可观察到，壳聚糖溶液浓度过小或过大，得到的产物粒径均比较大。 壳聚糖浓度较小，形成的纳米粒子结构松散。 壳聚糖浓度较大，纳米粒子间粘连现象严重，造成产物粒径大。 因此，通过TEM图表明，当壳聚糖溶液浓度为15 mg/mL时，制备得到的壳聚糖纳米粒子粒径小，形貌好，且分布均匀。 不同壳聚糖浓度纳米粒子TEM图Fig. TEM images of nanoparticles39。 shapes of different CS concentration(C1) 10 mg/mL (C2) 15 mg/mL (C3) 20 mg/mL 交联剂用量对壳聚糖纳米粒子的影响(1)粒径分布及其稳定性的分析，改变交联剂的体积对壳聚糖纳米粒子的影响不呈规律性分布。 这可能是由于选择的交联剂质量分数适中，在体积较小时已经能够与壳聚糖交联固化，当体积增加时，多余的交联剂不参加交联。 也可能是由于随着交联剂体积的增加，交联得到的壳聚糖纳米粒子结构松散，粒径分布不均匀，在洗涤过程中，大的粒子聚集沉淀被洗去，剩下粒径比较小的壳聚糖纳米粒子，因此壳聚糖纳米粒子的粒径与交联剂的体积无关。 ①同交联剂体积表27 交联剂(1 %)体积对纳米粒子粒径的影响Table 27Effect of G dosage on nanoparticles39。 sizesNo.Glutaraldehyde aq(1%)/mlSize()PdID12 D23 D34 D45 D56 不同交联剂体积对纳米粒子粒径的影响Fig. Comparison of different glutaraldehyde volume on nanoparticles39。 sizes②不同交联剂浓度，壳聚糖纳米粒子的粒径与交联剂的浓度有关。 戊二醛结构中存在着两个活泼的醛基，有很高的反应活性，易与壳聚糖分子中的自由氨基反应，形成交联的网状结构。 当交联剂浓度较低时，交联程度小，交联效果差。 随着交联剂浓度的增加，交联程度增大，交联结构紧密。 但浓度太大，导致局部浓。