基于脂蛋白纳米载体的小干扰rna靶向递送方法研究_毕业论文(编辑修改稿)

基于脂蛋白纳米载体的小干扰rna靶向递送方法研究_毕业论文(编辑修改稿)内容摘要：

送是否由受体介导。 为了解决这个问题 ,，我们首先分析了用 Alexa555标记 siRNA / rHDL 纳米粒处理的小鼠器官 (图 W2)。 rHDL 纳米粒在肝脏中的吸收最高，而在大脑、心脏、肺、肾、或脾中吸收很少。 静脉注射或腹腔注射 rHDL / Alexa555后，肿瘤组织对 rHDL纳米粒的吸收无显著差异。 用该方法进行长期治疗实验之前，我们下一个验证 STAT3 siRNA 偶联到rHDL 纳米颗粒 (siRNA / rHDL)在体内基因沉默的有效性。 STAT3 siRNA 的有效性首先在体外 SKOV3细胞上测试 (图 W3A)，与对照组 siRNA 相比， 5μ g 的STAT3 siRNA 导致 STAT3蛋白表达超过 80%的减少。 接下来，检测在体内沉默STAT3基因的有效剂量。 在 SKOV3ip1小鼠模型中我们注射 STAT3 siRNA /rHDL，剂量范围从。 第四天，单剂量注射 ，我们发现降低了 88% STAT3蛋白水平 (图 W3B)，在第 6天，蛋白表达有些回升。 根据这个实验，我们在后续实验中使用。 另一个关于癌症生长和转移的关键基因， FAK 也具有类似的结果 (图 W3C)。 在 SKOV3ip1小鼠模型中单剂量注射 FAK siRNA /rHDL 纳米粒 4天后， FAK 水平降低了 87%。 基于脂蛋白纳米载体的小干扰 RNA 靶向递送方法研究 Figure delivery of siRNA using rHDL nanoparticles. (A) Uptake of Alexa555labeled siRNA/rHDL in SKOV3ip1 tumors. A single IV or IP injection of mg/kg of Alexa555 labeled or mg/kg of IV and IP injection of untagged siRNA/rHDL was administered in mice bearing SKOV3ip1 tumors, and 48 hours later, tumors were harvested and counterstained with Hoechst (blue), and siRNA (red) uptake was assessed with fluorescence microscopy. The Hamp。 E image shows tumor histologic diagnosis. The adjacent graph shows percent Alexa555positive cells. (B)In vivo efficacy of STAT3 siRNA/rHDL in chemosensitive (HeyA8 and SKOV3ip1) and chemoresistant (HeyA8MDR) mouse models of ovarian carcinoma. *P .05 pared with controls. **P .05 pared with controls as well as docetaxel alone. (C)In vivo efficacy of STAT3 siRNA/rHDL in colorectal cancer model of liver metastases (HCT116). *P .05 pared with control siRNA/rHDL, **P .05 pared with STAT3 or oxaliplatin vivoefficacy of FAK siRNA/rHDL in the SKOV3ip1 ovarian cancer model.*P .05 pared with controls. **P .05 pared with controls as well as docetaxel alone. Error bars, SEM 基于脂蛋白纳米载体的小干扰 RNA 靶向递送方法研究 STAT3 或 FAK 基因沉默 对 肿瘤的生长和转移的影响 体内成功沉默 FAK 或 STAT3基因后 (图 W3B），我们接下来测试了这种是否用多烯紫杉醇化疗药方法的治疗有效性。 我们首先用 STAT3 siRNA / rHDL 靶向STAT3(图 2 B)。 在三个原位卵巢癌小鼠模型中用单独 STAT3 siRNA / rHDL 或偶联多烯紫杉醇进行治疗。 在 HeyA8 模型中，单独给 STAT3 siRNA / rHDL 或多烯紫杉醇减少了的 62%的肿瘤重量 (P ,两者 )。 与对照组比较， STAT3 siRNA / rHDL 和多烯紫杉醇的联合治疗使肿瘤重量减少的最多 (92%， P )。 在SKOV3ip1模型中结果类似 (图 2 B)。 另外，当 STAT3 siRNA / rHDL 有无多烯紫杉醇处理小鼠， HeyA8 和 SKOV3ip1卵巢癌模型中证实了肿瘤结数量的剧减。 (图W4A) 考虑到 STAT3的耐药性，我们还进行了紫杉醇耐药 HeyA8MDR 模型实验 (图2 B)。 正如预期，多烯紫杉醇对肿瘤的生长无显著影响。 STAT3 siRNA / rHDL 单药疗法使肿瘤生长减少了 76%(P)。 多烯紫杉醇和 STAT3 siRNA / rHDL 联合疗法使肿瘤细胞的增长减低的更多 (比起对照组， 91%， P ；比起多烯紫杉醇， 89%， P )。 肿瘤节数量也有类似的效果（图 2）。 我们在每一个治疗组的动物的局部转移频率进行了分析。 相比于对照组和多烯紫杉醇单药疗法， STAT3 siRNA / rHDL 是否偶联多烯紫杉醇都能显著降低上腹部和薄壁肝组织的转移。 接下来，我们研究在转移性结直肠癌小鼠模型（ HCT116 ）研究 STAT3沉默基因的治疗效果 ，该模型使 SR B1表达（图 2C）。 肿瘤细胞注射到脾脏后，转移扩散到肝脏。 STAT3 siRNA / rHDL 单独治疗导致在肿瘤的重量减少 79％ （ P ）。 对于这些实验，我们常用细胞毒性，奥沙利铂，偶联 STAT3 siRNA / rHDL。 奥沙利铂降低 55 ％的肿瘤生长（ P ）。 与对照组相比，奥沙利铂和 STAT3 siRNA / rHDL 偶联治疗可使肿瘤重量（ 96 ％， P ）和肝脏中转移损坏数目（ 86％ ， P ）显着减少。 为了评估 rHDL 纳米粒的安全性，我们评估用 rHDL 纳米粒处理小鼠的几个参数（图 W5 ）。 在两个不同治疗组中，动物体重或肝功能测试（ AST 和 ALT 比值）没有显着差异（图 W5 ， A基于脂蛋白纳米载体的小干扰 RNA 靶向递送方法研究 和 B ）。 与对照组相比，治疗结果显示没有显着变化后，多个正常器官用苏木精和伊红（ H ＆ E ）染色（图 W5C ） 为了测试 rHDL 纳米粒对其他靶点的效用潜力 ,我们进行了 FAK siRNA / rHDL 实验。 我们在 SKOV3ip1原位卵巢癌模型中用 FAK siRNA / rHDL 纳米粒靶向 FAK(图 2 C)。 FAK 或多烯紫杉醇单药治疗可使肿瘤重量减少 62%和 74%(两者 P )。 联合治疗显著减少肿瘤重量 (96%， P )，肿瘤节的数量 (74%， P )。 空 rHDL 纳米粒和对照 siRNA / rHDL 处理的小鼠之间没有显著差异。 STAT3 靶向 肿瘤微环境的 影响 为了了解 STAT3 / rHDL 的生物效应，在药物敏感的 (SKOV3ip1)和药物耐药(HeyA8MDR)卵巢癌模型中进行一系列的体内体外实验。 在 SKOV3ip1卵巢癌模型中 (图 3), STAT3基因沉默减少 26%细胞增殖 (P )，而多烯紫杉醇抑制 30%肿瘤细胞增殖 (P )。 与对照组比较， STAT3 siRNA / rHDL 和多烯紫杉醇联合治疗可抑制 48%肿瘤细胞增殖 (P )(图 3)。 在 HeyA8MDR卵巢。