双重回生处理锥栗淀粉的理化特性及体外抗氧化毕业论文(编辑修改稿)

双重回生处理锥栗淀粉的理化特性及体外抗氧化毕业论文(编辑修改稿)内容摘要：

4℃ 下分别保存 24 h、 36 h、 48 h， 将样品烘干后过 140 目筛得锥栗淀粉产品。 直链淀粉 含量的测定 采用碘比色法 [12] 测定锥栗淀粉的直链淀粉含量： ⑪ 标准曲线的绘制：取 50 mg 支链淀粉标准样品，加入 50 mL 容量瓶中，加入 1 mL无水乙醇润湿，再加 10 mL mol/L NaOH，沸水浴振荡加热 10 min 溶解淀粉，用蒸馏水定容摇匀。 用同样方法配制直链淀粉标准溶液。 精确吸取标准溶液于 50 mL 容量瓶中，化学化工学院 20xx 届本科毕业论文 4 配置一系列梯度标准溶液。 向各容量瓶加 20 mL 蒸馏水，用 mol/L HCl 调 pH 值为。 再加入 mL I2KI（碘试剂），定容摇匀，静置 10 min，在 620 nm 下，测吸光度（以蒸馏水作参比溶液）绘制标准曲线。 所得直链淀粉含量测定标准曲线计算公式为y=（ R2=）。 ⑫ 样 品测定：准确称取样品 100 mg，加 1 mL 无水乙醇，润湿振荡，再加 10 mL M NaOH，沸水浴加热溶解 10 min，冷却后用蒸馏水定容摇匀得样品液。 吸取 mL 样品液于 50 mL 容量瓶中，加 20 mL 蒸馏水后用 mol/L HCl 调 pH值为 ，加 mL I2KI，定容摇匀，静置 10 min。 在 620 nm下，测吸光度。 并用标准曲线 计算直链淀粉含量。 沥滤率的测定 参考 Chung HJ[13] 测沥滤率的方法。 取 20 mg 淀粉样品加入 10 mL 蒸馏水中， 80℃密封水浴加热 30 min。 冷却至室温， 20xx r/min 下离心 10 min。 倒出上清液，测定上清液直链淀粉含量。 （沥滤率表示每 100 g 干淀粉浸出的直链淀粉的百分比）。 平均聚合度的测定 采用碘吸收法 [14]，称取淀粉样品 20 mg加入 mL无水乙醇润湿样品，加入 2 mol/L的 KOH 溶液 1 mL，使样品充分溶解。 加入 10 mL 去离子水，用 mol/L 的 HCl溶液将 pH 值调至 ～ ，加水定容至 50 mL。 取 10 mL 于 100 mL 容量瓶，加入 80 mL去离子水和 2 mL I2KI 溶液 (I2 2 mg/mL 和 KI 20 mg/mL)，定容至 100 mL，立即混匀。 用紫外分光光度计扫描，波长 450～ 800 nm。 采用紫外 可见分光光度计进行扫描波长范围为 450~800 nm，测定最大吸收峰；淀粉是不同分子质量同系的混合物，所以表示时用平均聚合度（ DP）。 根据 Banks[15]公式① ： DP0 1 0 2 0 1 5 5 m a x  ① 溶解度和膨胀因数的测定 参照 Koo SH[16]等的研究方法，准确称取 M0= g 淀粉样品，加入到 30 mL 的蒸馏水中，在 85℃ 下磁力搅拌器中充分搅拌 30 min，再在 2026 r/min 下离心 15 min。 小心将化学化工学院 20xx 届本科毕业论文 5 上清液倒入培养皿中，并将离心管中的吸胀淀粉称重得 M1。 将上清液烘干直到恒重，称得培养皿上淀粉重 M2。 用公式 ② 计算溶解度和膨胀因数。 100MM%02 ）溶解度（ 1 0 0MM01膨胀因数 ② RDS、 SDS与 RS含量的测定 参照 Miao[1718]等的方法，略做改动。 称取 50 mg 淀粉粉末放入 15 mL 离心管，用 mL 含 %叠氮钠、 的醋酸 醋酸钠缓冲液混匀，预热至 37 ℃。 将 8 g 猪胰 α淀粉酶（ 3000U/g，上海希美生物科技有限公司）溶于 10 mL 上述缓冲液中，于 37 ℃ 孵育 10 min， 1500g 离心得到的上清液即 为 α淀粉酶溶液。 使用前在 α淀粉酶溶液中混入125 μL（ 300U/mL）淀粉葡萄糖酶（ 105789U/g，上海金穗生物科技有限公司）即得混合酶液。 3 份 200 μL混合酶液与 100 μL淀粉乳液的混合液配制后，立即置于 37 ℃ 往复式振荡水浴（ 170 次 /min）中依次反应 0、 20 和 120 min，加入 96%的乙醇溶液 900 μL钝化酶活性并使之沉淀。 沉淀在 4 ℃ 贮放 1 h， 4 ℃ 离心（ 5000 g） 10 min。 上清液中的还原糖含量采用葡萄糖氧化酶 /过氧化物酶（ GOPOD）分析试剂（ Wicklow 公司，爱尔 兰），用 SBA40C 生物传感分析仪测定。 快速消化淀粉（ RDS）、缓慢消化淀粉（ SDS）和抗性淀粉含量由 0 min（ G0）、 20 min（ G20）、 120 min（ G120）时的葡萄糖含量以及样品的初始干重（ S）按表达式 ③④⑤ 计算而得： SGGR D S /)(% 020  ③ SGGSD S /)(% 20xx0  ④ )%(%1% S D SR D SRS  ⑤ 体外抗氧化性 总抗氧化活性的测定 —磷钼络合物法 参考 Prieto[19]等的方法，并作适当修改。 配制浓度分别 10 mg/mL 的双重回生锥栗淀粉 淀粉溶液。 取 4 mL 磷钼试剂液（ mol/L 浓硫酸、 28 mmol/L 磷酸钠和 4 mmol/L钼酸铵），加入 2 mL不同浓度的 锥栗 淀粉样品液， 95℃ 水浴中恒温 90 min。 以蒸馏水调零，测定其在 695 nm 波长下测吸光度。 吸光度越高抗氧化能力越强，以 Vc化学化工学院 20xx 届本科毕业论文 6 作阳性对照（ Vc 配置浓度为 、 、 、 、 ）。 DPPH自由基清除率的测定 参考 Thaipong 等 [20]的方法，并作适当修改。 浓度对 DPPH 自由基清除率的影响：配制不同浓度 双重回生处理锥栗 淀粉样品液，精确吸取 mL，加入 mmol/L DPPH 溶液 mL，摇匀，常温放置 30 min，用无水乙醇调零，测定 517 nm处吸光度 Ai。 然后，测定样品溶液 mL 与乙醇 mL 混合液在 517 nm 处吸光度 Aj；测定 DPPH 溶液 mL 和乙醇 mL 混合液在 517 nm 处吸收度 Ac。 以 Vc 作阳性对照。 DPPH 自由基清除率按公式 ⑥ 计算。 以样品的不同浓度对清除率作图，可得清除率达到 50%时所需样品的量，即 IC50 值。 %1 0 0)1(% ci  A AA j清除率 ⑥ ABTS+清除能力的测定 参考 Re[21]等的 方法，并作适当修改。 配制浓度分别 10 mg/mL 的 双重回生处理锥栗淀粉 样品溶液。 精确吸取 2 mL，加入 2 mL ABTS+测定液，准确振荡 30 s后，以蒸馏水调零，测定 734 nm波长处的吸光度 Ai；以等量蒸馏水代替 ABTS+测定液，同样方法测定吸光度 Aj。 以 Vc 作阳性对照。 清除率按公式 ⑦ 进行计算。 %100)(( % ) i  jAA清除率 ⑦ 超氧阴离子自由基清除能的测定 参照 李燕凌 等 [22]的方法。 吸取 pH 的 TrisHC1 缓冲液 2 mL，加入不同浓度的 双重回生锥栗 淀粉溶液 2 mL，混匀后， 37℃ 水浴放置 20 min，再加入 37℃ 预热的 10 mmol/L邻苯三酚 1 mL，混匀后准确反应 4 min。 加入 1 滴浓盐酸终止反应，于 420 nm波长下测定吸光值 Ai；以蒸馏水代替邻苯三酚，同样方法测定吸光值 Aj；以蒸馏水代替样品液，同样方法吸光值 Ao。 以 Vc 作阳性对照。 清除率按公式 ⑧ 进行计算。 化学化工学院 20xx 届本科毕业论文 7 %100)1(( % ) oi  A AA j清除率 ⑧ 脂质过氧化抑制作用的测定 参考 OckSook 等 [23]的方法，并作了适当改进。 配制浓度分别 10 mg/mL的 双重回生 锥栗淀粉溶液。 于样品管中依次加入 1 mL LLS 溶液、 1 mL mmol/L 三氯化铁溶液、 2 mL 不同浓度的 锥栗淀粉 样品 溶液 ，混匀。 37℃ 水浴避光反应 1 h，再加入2 mL TCATBAHCl混合液， 95℃ 水浴 15 min，迅速冷却，以 4000 r/min 离心 10 min，以蒸馏水调零，取上清液在 535 nm测吸光度值 Ai；以等量蒸馏水代替样品液，同样方法测得吸光度 Ao。 以 Vc 作阳性对照。 抑制率按 公式 ⑨ 进行计算： %1 0 0)1(( % ) oi  AA抑制率 ⑨ 亚硝酸盐清除率的测定 参考赵二劳 [24]等的方法，取 5 mg/L 的 NaNO2 标准液 mL 于 25 mL 比色管中，加入不同浓度的 双重回生处理 锥栗淀粉 样品 溶液，常温放置 30 min 后，加入 %对氨基苯磺酸 mL，摇匀静置 5 min，再加入 %盐酸萘乙二胺 mL，用蒸馏水稀释至刻度，放置 15 min 后，以蒸馏水调零，测定其在 540 nm波长下的吸光度值 Ai，平行做三次。 以等量蒸馏水代替样品液，同样方法测定其吸光值 Ao。 以 Vc 作阳性对照。 清除率按公式 ⑩ 进行计算。 %1 0 0)1(( % ) oi  AA清除率 ⑩ 3 结果与讨论 双重回生处理锥栗淀粉的 表观直链淀粉含量 双重回生处理锥栗淀粉样品中的表观直链淀粉含量见表 1。 由表 1 可知淀粉表观直链淀粉含量都在 (177。 ) % ~ (177。 ) % 范围内。 对表 1 中数据进行单 因素方差分析可知， 两次回生时间 对表观直链淀粉含量的影响不显著（ P＞ ）。 未处理锥栗原淀粉表观直链淀粉含量 %，与原淀粉相比，各个样品的表观直链淀粉含量化学化工学院 20xx 届本科毕业论文 8 都有比较显著的增加（ ＜ P＜ ），原因是双重回生处理锥栗淀粉过程中，直链淀粉先从淀粉颗粒中脱离出来，同时因高温作用，部分支链淀粉发生降解，增加了淀粉乳液中直链淀粉的含量。 表 1 双重回生处理锥栗淀粉样品的直链淀粉含量 (%) 第一次回生时间（ h） 第二次回生时间 (h) 24 36 48 24 177。 177。 177。 36 177。 177。 177。 48 177。 177。 177。 双重回生处理锥栗淀粉的 沥滤率 双重回生处理锥栗淀粉样品中的沥滤率含量见表 2。 沥滤率表示每 100 g 干淀粉浸出的直链淀粉的百分比。 同种淀粉的沥滤率与处理的温度有关，随温度的升高而增大 [25]。 而在同一温度下（本实验在 80℃ 下），温度循环回生处理锥栗淀粉样品的沥滤率如表 4 所示。 由表 2 分析可知，虽然当第一次回生时间相同时，随第 二次回生时间增加，其沥滤率增大；当第二次回生时间相同时，随第一次时间曾长，其沥滤率也增大，但通过对表中数据进行单因素方差分析可知，两次回生时间对沥滤率的影响并不显著（ P＞ ）。 表 2 双重回生处理锥栗淀粉样品的沥滤率 (%) 第一次回生时间 (h) 第二次回生时间 (h) 24 36 48 24 177。 177。 177。 36 177。 177。 177。 48 177。 177。 177。 化学化工学院 20xx 届本科毕业论文 9 双重 回生处理锥栗淀粉的 平均聚合度 淀粉是多分散的，它由一系列的不同分子量大小的淀粉分子组成。 聚合度 指聚合物分子链中连续出现的 重复单元 (或称链节 )的次数。 聚合度可作为聚合物分子质量的量度，是衡量高分子聚合物的重要指标，聚合度小，直链淀粉分子短，运动比较剧烈，扩散速度也较大，所以较难聚集；而聚合度太大，直 链淀粉过长，分子间的斥力较大，也难聚集，所以只有中等长度才最有利于聚集 [26]。 表 3 是经双重回生处理锥栗淀粉样品的平均聚合度，原锥栗淀粉的 λmax为 ，平均聚合度为 ，而处理过程取样的 λmax有所升高，都在 543~ 范围内。 由表3 可见，各样品的平均聚合度都随回生时间增加有所升高，可能原因是经处理后的样。