基因工程

Transformation and transfection Packaging phage DNA in vitro Alternative DNA delivery methods 本章要点： 掌握基因工程受提细胞的类型和要求。 掌握载体的基本结构和质粒载体、噬菌体载体的特点、构建原理。 掌握在体外源 DNA 连接的方式和原理 以及感受态菌的制备原理。 掌握基因转入受体细胞的基本方法和原理

度高时，分子末端数也高，连接几率增加，反应产物的产量随之上升； DNA 分子浓度也影响反应体系中的产物构型。 通常在两种构型产生：①线性 DNA 分子，不同 DNA 分子之间首尾相连形成线状结构；②环状 DNA 连接物，同一分子的两个末端或多个分子首尾连接形成的线性分子的两端 发生连接反应，形成环化分子。 重组 DNA 分子的构型对后续的转化过程有显著的影响

技术，可分为转基因动物与转基因植物两大分支。 人们常说的“遗传工程 ”、 “基因工程 ”、 “遗传转化 ”均为转基因的同义词。 转基因动物技术 转基因动物是指用实验导入的方法将外源基因在染色体基因内稳定整合并能稳定表达的一类动物。 到目前为止，人们已经成功地获得了转基因鼠、鸡、山羊、猪、绵羊、牛、蛙以及多种转基因鱼。 主要的转基因动物技术包括有： 常用的动物转基因技术 （ 1）．核显微注射法

CaCl2 法 ) 将培养液转入离心管中 ,冰上放置 10分钟 ,然后于 4℃下 3000g离心 10分钟。 弃去上清 ,用预冷的 ,冰上放置 1530分钟后 ,4℃下 3000g离心 10分 钟。 弃去上清 ,加入 4ml预冷含 15%甘油的 ,轻轻悬浮细胞 ,冰上放置几分钟 ,即成感受态细胞悬液。 感受态细胞分装成 200μ l的小份 ,贮存于 70℃可保存半年。 三、 转化 从

批准了第一个在我国生产的基因工程药物 —— 重组人干扰素α lb，标志着我国生产的基因工程药物实现了零的突破。 重组人干扰素α 1b 是世界上第一个采用中国人基因克隆和表达的基因工程药物，也是到目前为止唯一的一个我国自主研制成功的拥有自主知识产权的基因工程一类新药。 从此以后，我国基因工程制药产业从无到有，不断发展壮大。 1998 年，我国基因工程制药产业销售额已达到了 亿元人民币。 截止

棉铃虫的极好前景。 动物转基因育种 动物基因工程研究主要集中在改良家畜、家禽的经济性状和通过转基因动物进行药物或蛋白质的生产等方面 , 目前已取得了显著的成就 , 先后培育出转基因猪、羊、牛和鱼等 , 另一种转基因猪是带有人体基因的猪 , 这种转基因猪客望能解决人体移植动物器官的遗体排斥问题。 随着动物基因工程技术的逐渐成熟和转人体血红蛋白的基因猪、转人体血清蛋白的基因山羊等的问世 ,

猪乳腺蛋白基因的 等调控组件重组在一起。 F8 基因 cDNA 可通过克隆筛选获得，该 cDNA 比染色体上的 F8 基因短，原因是该cDNA没有。 （ 6）为获得更多的转基因母猪，可以采用体细胞克隆技术，将纯合转基因母猪的体细胞核注入 ，构成重组胚胎进行繁殖。 【答案】（ 1）不能 0 （ 2） XHXh，遗传图解如下： 在 III3 形成卵细胞过程中的减数第二次分裂后期，带有基因 H

（重组质粒或重组噬菌体 DNA），根据已知重组时外源基因两端的酶切位点，分别用相应的两种内切酶进行酶解，经琼脂糖电泳后，原 载体因无外源性目的基因，切开后变成线性，电泳呈一条带，若载体上有外源性目的基因插入，切开后电泳出现两条带：一条为载体质粒线性条带，一条为释放出的插入基因片断的小分子条带，这样就可以看出载体中是否有插入的目的基因片断，以及由 DNA marker

p 的 DNA 片段就能分开。 聚丙烯酰胺凝胶电泳很快 ,可容纳相对大量的 DNA,但制备和操作比琼脂糖凝胶困难。 聚丙烯酰胺凝胶采用垂直装置进行电泳。 目前 ,一般实验室多用琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行 DNA 电泳。 琼脂糖主要在 DNA 制备电泳中作为一种固体支持基质 ,其密度取决于琼脂糖的浓度。 在电场中 ,在中性 pH 值下带负电荷的 DNA 向阳极迁移

带我的师傅是一个个中专生，开始时我觉得做这个很简单，不用学，一看就会，做是会做，不过不是最省力的方法，就那么做啦一天，做得很累，后来，我看师傅做看他做的很轻松很快，我就在想为什么 我不行呢，难到是我不如他，我知道我不是只是我不够虚心，不想学，看不起 这个岗位，是我的态度，既然找到的根本原因，那就好解决啦。 后来，仔细看师傅的动作，怎么最省力，怎么最舒服。 并且不懂的地方虚心讨叫那些老员工。